正丁醇相的分离

正丁醇部位的分离一向是分离工作中的难点，但由于其出新率远高于小极性部位，所以还是值得下一番功夫的。

一般来说，正丁醇部位往往含有单糖、二糖等小分子糖，多种酚类化合物，以及苷类化合物，极性较大，在硅胶柱上吸附较多，成点性差，分离效果不好。因此，一般说来，对于正丁醇部位可采取以下方法：

1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。

2. 反相硅胶分段。 如果正丁醇部位量不是太大，或者课题组有大反相柱，可以考虑用反相柱砍段。唯一需要提醒注意的是，由于我们一般是用正相硅胶板检测化合物分离情况，所以反相柱 砍段后往往各组份在硅胶板上看起来比较混乱，不如硅胶柱砍段后那么直观，一定要小心对比，否则会越分越乱。

3.正相柱分配色谱层析。 如果正丁醇部位量太大，或者课题组没有大的反相柱用来分段，那么可以考虑氯仿：甲醇：水体系来砍段。我一般用8：2：1、7：3：1以及6.5：3.5：1依次洗脱，效果不会很好，但两到三次反复上柱后各部分还是可以看得到点的。这时再会反相柱细分，拿十到二十个点应该没问题的。

正丁醇在提取分离这一块是难度最大

1.正丁醇层部分极性大，容易变化，譬如，皂苷类发生水解，变成次级皂苷和苷元。

2.化合物稳定性差，容易变化，往往导致重复性差，譬如，上柱子前可以看见一个很好的点，准备分离这个目标点，但是从柱子上下来以后，点比上柱子前还多。

3.就难于选择了，比如，极性最小三相氯仿甲醇水系统中的一般最小的是9：1：0.1，但是如果用这个比例还是展到了最上面，你肯定想把极性调小，比如，换成20：1，或者是15：1，跑出来就是一条线，想往其中加水，但是水加多少呢？加多了，三相就变成分层的了，1％不算多吧，可是，还是分层，真是不好处理。

4.溶解性也不好，遇到一些东西，说什么也不溶解，实在没有办法，有时候1克的东西，全部溶解都需要50-80ml的溶剂，你想想用这么多的溶液来拌样，是个什么样的工作量，推荐系统有：氯仿甲醇水系统，正丁醇醋酸水系统，乙酸乙脂甲醇水系统，分极性大的部分，不能拘泥于硅胶柱，应结合多种色谱分离手段，应多尝试用ODS柱，凝胶柱，还可以考虑制备薄层，有时此法效果极其好，有条件的可以考虑制备液相进行分离

可以先考虑用树脂，甲醇-水系统

然后再用硅胶，氯仿-甲醇-水

然后再用别的方法进一步分离

运气好的时候从甙元到糖都能得到

一篇文献的一部分

The n-BuOH-soluble fraction was separated first by column chromatography on a highly porous synthetic resin, Diaion HP-20 (¼ ) 5.0 cm, L ) 60 cm) (Mitsubushi Chemical Co., Ltd., Tokyo, Japan), with MeOH-H2O [(1:4, 8 L), (2:3, 8 L), (3:2, 8L), and (4:1, 8 L)]; 500 mL

fractions were collected. The residue(26.6 g in fractions 13-18) of the 40% MeOH eluate obtained on Diaion HP-20 column chromatography was subjected to

silica gel (500 g) (70-230 mesh; Merck Co., Ltd., Darmstadt,Germany) column chromatography with CHCl3 (2 L) and CHCl3-MeOH (99:1, 3 L), (49:1, 3 L), (97:3, 3 L), (24:1, 3 L),(19:1, 3 L),

(47:3, 3 L), (23:2, 3 L), (9:1, 4.5 L), (7:1, 4.5 L),(17:3, 4.5 L), (33:7, 3 L), (4:1, 3 L), (4:1, 3 L), and (7:3, 3 L),fractions of 500 mL being collected. The residue (2.26 g in fractions 35-41) of the 6% MeOH eluate was separated by reversed-phase silica gel (Cosmosil) column chromatography to give 1.14 g of a residue, which was then purified by DCCC to give 563 mg of a residue in fractions 175-232 and 313 mg

of 6 in fractions 233-261. The former was purified by DCCC again, followed by recrystallization from MeOH, to afford 11.0 mg of 7.

整个过程基本上就是：

树脂（甲醇-水）-->硅胶（氯仿-甲醇-水）-->ODS（甲醇-水，梯度）-->DCCC（上行） 应该是挺成熟的方法

但是具体要怎样做，还要根据自己的样品的情况以及实验室的条件决定

目前我正在做正丁醇部位的分离，好难啊现在接了许多流份，在合并一些流份之后，发现有些上面漂了一层白色的物质，有点像蜡状，问了下同学说是可能是油脂类的东西，但是我觉得正丁醇部位的东西怎么会含有这类东西呢？

答：萃取不完全有可能出现少量的油脂。你提到流份，那就不是油脂，我也碰到过，应该是样品中的灰尘或硅胶的碎沫沫，不是好东西，当溶液挥干后，它就干吧在小瓶壁上，再用溶剂洗也洗不下来。

1、挥干后用不同极性的溶剂洗（极性从小到大），最好是一种不能溶解结晶能溶解杂质的溶剂。——限于各种系统跑都是一个主斑点。

2、两个点以上的样品就得再上柱子分离啦，凝胶，硅胶等等。

问：但是我的东西可以用溶剂溶解，我试过了， 由于用的是二氯甲烷/甲醇系统洗脱，这些物质溶于二氯甲烷不容于甲醇，再说我接的流份都是中间的了，不会有你说得样品中的灰尘或硅胶的碎沫沫吧，希望没有！那应该是什么类的东西呢？我还有一个问题想请教下，在我合并的其中几个流份里有白色的沉淀出现，溶剂挥干后，我把这些沉淀转移了，发现不溶于甲醇，但溶于二氯甲烷，因此我把这些沉淀用二氯甲烷溶解了，但发现溶剂挥干后，里面是一层没有形状的物质，请教一下大家，我下部该如何进行？重结晶吗？

答：第一：有liuhai99995 说的那种可能哦，样品种灰尘下来也是需要点时间的呀！另外，你可以用什么溶剂溶解了，点在板子上，不用展开，直接看荧光，然后喷通用显色剂，如果发现有荧光或有颜色变化，就说明不是灰尘喽，恭喜你，下一步，就是展开，看有几个斑点啦！

第二：那样的情况最好是沉淀析出一定量就把剩余的溶剂吸出来，转入另一个瓶子种继续析出沉淀。否则，溶剂挥干其他杂质又和沉淀混在一块啦。建议点板，看有几个点，一般一个点、两个点（其中一点的 含量很大）才能看到漂亮形状哦。

正丁醇层的成分极性比较大

不适合用硅胶来分离

反相比较适合，建议先上中低压ODS，或者开放ODS砍个断

之后制备液相进行分离