RNA的提取和逆转录
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2.5 从293T细胞中提取总RNA
2.5.1 实验材料
2.5.2 实验仪器
2.5.3 实验方法
（1）细胞收集完毕后，用1ml TRI-Reagent 重悬细胞(不超过1×107 个细胞)，并剧烈振荡以裂解细胞。 （2）将细胞裂解液冰浴5分钟。
（3）向细胞裂解液中加入0.2 ml 氯仿，剧烈振荡15秒。
（4）将细胞裂解液冰浴5分钟。
（5）将细胞裂解液在4 ℃，13000 rpm的条件下离心15分钟。
（6）将上层水相转移至新的1.5 ml无菌离心管中，加入0.5 ml异丙醇颠倒数次混匀，冰浴5分钟。
（7）将内容物在4 ℃，13000 rpm的条件下离心15分钟，RNA将形成沉淀。 （8）弃去上清液，用1 ml 75％乙醇（Ambion RNase-free water与无水乙醇现配制）清洗RNA。
（9）在4 ℃，13000 rpm的条件下离心10分钟。
（10）弃去上清液，将RNA置于无菌环境中室温干燥10分钟。 （11）用30 μl Ambion RNase-free water溶解RNA。
（12）测定RNA的浓度，并于1％琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。 （13）将RNA溶液置于-80 ℃的冰箱中贮存备用。
2.6 逆转录PCR
2.6.1 实验材料
2.6.2 实验仪器
2.6.3 实验方法
按下表于0.2 ml无菌PCR管中准备50 μl的逆转录体系：
（2）按下表中的程序进行逆转录反应：
（3）反应结束后，将cDNA 置于-20 ℃贮存。