麦汁和啤酒的a-氨基氮检测方法
麦汁和啤酒的α-氨基氮检测方法
1. 目的
1.1 用分光光度法比色测定麦汁和啤酒的α-氨基氮。
2. 范围
2.1 本方法适用于所有种类的麦汁和啤酒。
3. 原理
3.1 茚三酮氧化剂与氨基酸反应被还原成水合茚三酮，氨基酸被氧化脱羧，产生醛、二氧化碳和氨，然后氨水合茚三酮和还原型水合茚三酮反应，生成兰紫色络合物，产生的颜色深浅与游离α-氨基氮含量成正比，在波长570nm 下有最大吸收值，可用来比色测定。
4. 安全及预防
4.1 穿戴PPE ，如隔热手套；身体勿靠近沸水，以免溅出；具塞试管的玻璃塞应盖紧，以免飞溅。
4.2 操作必须严防任何外界痕迹量的氨基酸引入，因此有关玻璃仪器都必须仔细洗涤，洗涤后只能接触其外部表面，移液管必须用吸球吸。
4.3 测定中加入果糖等作为还原性发色剂，碘酸钾在稀释液中使茚三酮保持氧化态，以阻止进一步发生不希望的生色反应。
5. 试剂
5.1 显色剂： 10g Na 2HPO 4·12H 2O(磷酸氢二钠)
6g KH 2PO 4（磷酸二氢钾）
0.50g 水合茚三酮
0.30g 果糖
将以上试剂用水溶解后稀释至100mL （此溶液在低温棕色瓶子可保存2周，PH 应为6.6～6.8）。
5.2 稀释溶液：称2g 碘酸钾（KIO 3）溶于600mL 水中，再加96%乙醇400mL ，贮存于冰箱。
5.3 标准溶液：溶0.1072g 甘氨酸于100mL 水中，在冰箱贮藏。
6. 仪器设备
6.1 紫外可见分光光度计UV-2450；
6.2 25mL 具塞试管；
6.3 移液枪：
6.4 电炉（1000W-2000W ）；
6.5 200mL 容量瓶；
6.6 恒温水浴锅（精度0. 5℃）；
7. 步骤
7.1 取过滤后的麦芽汁2.00mL ，置于200mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
7.2 吸取标准液2.00 mL，置于各个200mL 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。
7.3 依次吸取2.00mL 蒸馏水，稀释后的标准液，稀释后的麦芽汁溶液于试管架的试管中（每吸取一样品，移液枪应用该样品润洗3次），并在各试管中加入1.00mL 显色剂，混匀，在恒沸水浴中准确加热16分钟，取出在20℃水浴中恒温20分钟。
7.4 在各试管中加入5.00ml 碘酸钾稀释液并摇匀，于30分钟内在570nm 波长处用10mm 比色皿测定其吸光度，测定时以装蒸馏水试管为空白，装标准液为标准，以后依次为麦汁。
样品溶液的吸光度 8. 结果的表示和方法的可靠性
α-N （mg/L麦芽汁）=----------------------------×200 标准溶液的吸光度
计算结果应保留整数