铜绿假单胞菌的耐药性与金属β-内酰胺酶检测
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● 潍 坊 医 学 院学 报
200 7
年
第 29 卷
第 6 期◆
5 15
铜 绿 假 单 胞 菌 的 耐 药 性 与金 属 p 内酰 胺 酶 检测
一
陶元勇 李加村 李建花 裴景亮 张培森
。
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( 潍 坊 医 学 院 附 属 医 院检 验 科 山 东 潍 坊
，
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铜 绿 假单 胞 菌 是 院 内感 染 的 重 要 菌 株 在 我 院其 分 离 率 在
，
患 者 送
检 的痰 尿 分 泌 物 等 标 本 中 共 分 离 铜 绿 假 单 胞 菌
、
、
356
革 兰 阴 性 杆 菌 中居 第
、
2
位 而 且 对 抗 生 素耐 药 性 强 临 床 感 染
，
，
株
．
。
以 A T CC 2 7 85 3 培 养基
。
，
产
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型 菌株 为 质 控 菌株
。
治疗 清 除难 度 大 因 此 合 理 正 确 地 选 择 抗 生 素 至 关 重 要
，
、 ，
。
亚
1 2
营养 琼脂 与
M H
琼脂 为杭 州 天 和 微 生 物 试 剂 有
胺 培 南 美 罗 培 南 等 碳 青 酶 烯 类 抗 生 素 自问 世 以 来 被 广 泛 应
用 于 铜 绿 假 单 胞 菌 等 细 菌 所 致 的严 重 感 染 并 取 得 了 很 好 的 效 果
。
限公司产 品
1 3
．
药敏 纸 片
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、
为北 京 天 坛 药 物 生 物 科 技 开 发 公 司 产 品 部
，
近 年 来 随着 该 类 药 物 的 临 床 应 用 耐 药 菌 株 不 断 增 加 其
，
，
分为
产 品 均在有效期 内
，
、
。
包 括 ：阿 米 卡 星 ( A N ) 妥 布霉
、
、
耐 药 机 制 多种 多种 酶 可 以 水 解 亚 胺 培 南 底 物 其 中 由
， ，
一
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素 ( T M ) 奈替 米 星 ( N E T ) 哌 拉 西 林 ( P I P ) 头 孢 哌 酮 ( C F P )
头 孢 曲松 ( C R O
、
、
3 内酰胺 酶能 水解 碳青酶烯 类抗 基 因 编 码 的 质粒 介 导 的 金 属 1
) 头孢 他 啶 (
、
CA Z
) 头孢西 丁 (
、
、
F OX
) 头孢 吡肟
、
生素
。
本 文 收集
356
株 铜 绿 假 单 胞 菌 对 此 进 行 了金 属 B 内 酰
．
( F E P ) 哌 拉 西 林 ／他 唑 巴 坦 ( P I P ／T Z ) 头孢 哌 酮 ／舒 巴 坦 ( C F P ／
su
胺 酶 以 及 耐 药性 检 测 报 告 如 下
，
。
) 替 卡 西 彬 棒 酸 ( T I C ／C A ) 羧 苄 西 林 ( C A R ) 多粘 菌 素
、
、
、
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1 1 1
．
材料与方法
细
(PB
)
、
亚 胺 培 南 ( IP M
、
) 美罗培 南 (
、
ME M
) 左 氧氟 沙 星 (
、
LVF
)
、
加 替 沙 星 ( G T F ) 氨 曲南 ( A Z T ) 环 丙 沙 星 ( C I P ) 等 2 0 种
200 1
。
菌来 源
年
1
月
～
200 5
年 5 月 从 我 院 门诊 住 院
，
、
I
．
4
细
菌鉴 定
按照《 全 国临床检验操作规程 》 (第
2
版)进
[ 作 者简 介 ]
陶元 勇 ( 1 9 6 4 年 5 月
～
) 男 ( 汉 族 ) 山 东 省青 州 市 人 主 管技师
， ，
，
。
主 要 研 究 方 向 ： 医 学 微 生 物检验 学
。
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５１ ６
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Ｍｅ ｄ Ｗｅ ｉ ｆ ａ ｎ ｇ Ｖ ｏ １ ． ２ ９ Ｎｏ ． ６ ２ ０ ０ ７ Ｄ
行， 部分菌株经 Ａ Ｐ ￣０ Ｎ Ｅ验证 。 １ ． ５ 药敏 实验
，
Ｉ Ｐ Ｍ＋ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ与 Ｉ Ｐ Ｍ抑菌环之差 、 Ｃ Ａ Ｚ＋Ｅ Ｄ Ｔ Ａ与 Ｃ Ａ Ｚ抑 菌 环 之
选择对铜绿假单胞 菌有效 的２ ０种抗生素按照
事先 配 制 ０ ． ５ ｍ ｏ ￣Ｌ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ
差
同时大 于或等于 ５ ｍｍ， 只有 ２株仅 Ｃ Ａ Ｚ＋Ｅ Ｄ Ｔ Ａ与 Ｃ Ａ Ｚ抑菌
环之 差 大 于或 等 于 ５ ｍｍ。
３ 讨 论
Ｋ ・ Ｂ法进行 ， 结果判断按照 Ｎ Ｃ Ｃ Ｌ Ｓ标准。
１ ． ６ 金属 １ ３ － 内酰胺 酶检 测方 法
（ ｐ Ｈ ８ ． ０ ） ， 并经高压灭菌后备用 。参照 文献 进 行。将待测 菌 株制成 ０ ． ５麦氏单位菌液均匀涂 布于 ９ ０ ｍ ｍ Ｍ — Ｈ琼脂 平板上 ， 在平板上放置 Ｉ Ｐ Ｍ（ １ ０ １ ｘ ｇ ） 、 Ｃ Ａ Ｚ （ ３ ０ １ ｘ ｇ ） 各 ２片 ， 两两之 间距离 不小于 ２ ５ ｍ ｍ， 然后在其中 １ 片Ｉ Ｐ Ｍ、 Ｃ Ａ Ｚ上无菌操作 分别加入
１ ０ ｔ ｄ ０ ． ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ溶 液 ， 放３ ５ ℃孵育 １ ８ ～２ ４ ｈ观察 结 果 。用
在 革 兰 阴性 杆 菌 中 ， ｐ 一 内酰 胺 酶 的表 达 是 细 菌 对 Ｂ 一 内酰 胺
类抗生素耐药最普 遍最 有效 的机 制。 目前 已经发 现 的 Ｂ 一 内酰 胺酶 已达 ２ ０ ０余种 ， 大多 属于活性 部位 为丝 氨酸残 基的酶 ， 但 有一小部分活性 中心为金属离子。１ ９ ８ ９年 ， Ｂ ｕ ｓ ｈ首次将该类酶
归为金属 Ｂ 一 内酰 胺 酶 （ ｍ ｅ ｔ ａ ｌ ｌ ｏ 一 ３ １ 一 ｌ ａ ｃ ｔ ａ ｍ ａ ｓ ｅ ） ， 简 称 金 属 酶 。金 属 酶不 仅 对 Ｂ 一 内酰 胺 酶 的抑 制 剂 敏 感 性 差 ， 而且 能水 解 包 括 碳 青
卡尺分别测量 ４个纸 片的抑菌环 直径 ， 若 Ｉ Ｐ Ｍ ＋Ｅ Ｄ Ｔ Ａ直 径与 Ｉ Ｐ Ｍ直径之差 ≥５ ｍ ｍ， 和／ 或Ｃ Ａ Ｚ＋Ｅ Ｄ Ｔ Ａ直径 与 Ｃ Ａ Ｚ直径之差
≥５ 咖 ， 则判 为金 属 Ｂ 一 内酰 胺 阳性 。
２ 结 果与 分 析
酶烯 类（ ｃ ａ ｒ ｂ ａ ｐ ｅ ｎ ｅ ｍ ｓ ） 在 内的一大类 Ｂ － 内酰胺类抗 生素。本文 采用 Ｃ Ａ Ｚ 、 Ｉ Ｐ Ｍ纸片法从 ８ ２株铜绿 假单胞菌 中检测 出 １ ６株 产 金属 Ｂ 一 内酰胺酶（ １ ９ ． ５ ％） ， 比有关文献报道稍高 Ｊ 。金属酶抑 见表 １ 。结果 显 制剂可用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、 Ｆ ａ Ｃ １ ： 、 Ｃ ｕ Ｃ １ ： 、 巯 基丙酸 等 ， 应用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ作 为金
属 酶 抑 制 剂 可 使 结 果 稳定 且 方法 简 便 。 金 属 酶 不 仅 对 常用 的酶 抑 制 剂 如 克 拉 维 酸 、 他唑 巴坦 、 舒 巴坦 敏 感 性 差 ， 而且 能够水 解亚胺培 南 、 美 罗 培 南 等 碳 青 酶 烯
２ ． １ 铜绿假单胞 茵 对 １ ８种 抗 生素 耐药性
示， 铜绿假单胞菌对 氨基糖苷类抗生 素耐药率 以 Ｎ Ｅ Ｔ稍低 ， 以
往常用药物 Ｃ Ａ Ｒ敏感株极少 ， 基本无效 。含酶抑制剂 （ Ｓ Ｕ， Ｃ Ａ，
眩）
复合制剂已经有半数 以上耐药 ， 碳青酶烯 类抗 生素耐药 菌 株相对较少。喹诺酮 类药 物耐 药率 普 遍较 高 ， 即使 是 ４代 的 Ｇ Ｔ Ｆ虽然 临床应 用 时间短 ， 使用 量小 ， 仍有 ６ ３ ， ２ ％菌 株 耐药 。 单环 Ｂ 一 内酰胺类药物氨 曲南与多肽类抗 生素多粘 菌素 Ｂ耐药 菌株极少 。Ｃ Ｆ Ｐ ／ Ｓ Ｕ临床应用初 期敏感 性很 高 ， 在短短 ４年 时 间里大量使用 以后 耐药 率持 续增 加 ， 至今 耐药 率 已达 ７ ０ ％ 以
匕。
类抗生素 。根据 Ｂ ｕ ｓ ｈ — Ｊ ａ ｃ ｏ ｂ ｙ — Ｍｅ ｄ ｅ ｉ ｒ ｏ ｓ 分类法 ， 按照水解 底物的 不 同金属酶又分为 ３组亚群 ： ３ ａ 、 ３ ｂ 、 ３ ｃ 。产生于铜绿 假单胞 菌 的金属酶属于 ３ ａ 组， 该组金属酶作用底 物最广 ， 可水解青霉 索 类、 头孢菌素类 、 碳青酶烯类 ， 但 对氨 曲南例 外 ， 耐药 菌株较少 。 铜绿假单胞菌对亚胺 培南耐药 的主要 原因是 细菌外膜 通透 性 降低尤其是 Ｄ ： 蛋 白的缺失 ， 其 次是某 些 １ ３ 一 内酰胺 酶的水解 作 用 。两种机制共 同作用使铜绿 假单胞 菌几乎 对所有 Ｂ 一 内酰 胺类抗生素耐药 Ｊ ， 但是对多肽类抗生素多粘菌素 Ｂ敏感性 较 高， 本文仅有 ４株 菌耐 药可 以作为产金 属酶铜绿假 单胞菌治疗 的首选。对 ４代头孢菌素中的头孢 吡肟耐药 率只有 ２ ９ ． １ ％， 可
以为 其 增加 另一 种 选 择 。
表１ ２ ０种抗 生素 对 ３ ５ ６株 铜 绿 假 单 胞 菌 的耐 药 性
尽管金属酶 与其他丝氨酸 Ｂ 一 内酰胺酶相 比 ， 种类和数 量都 较少 ， 但其耐药性更为广泛 。碳青酶烯类 抗生素是 目前临床治
疗 严重 感染 的 主要 药 物 ， 尤 其是 对 产 Ｅ Ｓ Ｂ Ｌ ｓ 、 Ａ ｍ ｐ Ｃ菌 株 的首 选 药 物 。 碳青 酶 烯 类 的大 量 使用 ， 无 疑 会 选 择 出更 多 的 产 金 属 酶
株， 将大大降低该 类药 物 的疗 效和 应用 范围。因此 ， 我 们在选
择 抗 生 素 时 更注 意 保 护 使 用 ， 应根据 细菌药物敏感 实验结果合 理 选择 ， 同时 密切 监 视 耐 药 的发 展 趋 势 。 为 了 防止 质 粒 介 导 的
金属酶所造成 的耐药性扩散 ， 临床微生 物实验室应 建立金属 酶
方法。
［ 参考文献］
［ １ ］ Ｌ ｅ ｅ ｋ Ｃ Ｙ， Ｓ ｈ ｉ ｎ Ｈ Ｂ， Ｋ ｉ ｍ Ｙ Ａ． Ｓ ｉ ｍ ｐ ｌ ｅ Ｍｏ ｄ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ Ｈ ｏ ａ ｇ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ＤＴ Ａ Ｄ ｉ ｓ ｋ
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ｒ ｏ ｌ ｙ ｚ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｓ ｅ ｄｏ ｎ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ
［ Ｍ］ ． Ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， １ ９ ９ ８ ： １ ３ ９ ． ［ ２ ］ 刘建栋 ， 吕火祥 ， 俞晓洁 ， 等． 耐亚胺 培南铜绿假 单胞菌 的临床分 离及耐药谱分析［ Ｊ ］ ． 上海 医学检验 杂志， ２ ０ ０ １ ， １ ６ （ ２ ） ： ９ ８～ ９ ９ ． ［ ３ ］ 吴永乐 ， 张永信． 铜绿假 单胞菌对碳青 酶烯类的耐药 机制 ［ Ｊ ］ ． 国
２ ． ２ 铜 绿 假 单 胞 茵金 属 １ ３ 一 内酰 胺 酶 检 出情 况
对Ｉ Ｐ Ｍ耐药 ８ ６
外 医 药抗 生素 分 册 ， １ ９ ９ ５ ， １ ６ （ ５ ）： ３ ４ ９～３ ５ １ ．
株菌 中， 仅 有 ４株 对 Ｃ Ａ Ｚ敏 感 ， ７ ３株 对 Ｃ Ａ Ｚ耐 药 而 对 Ｉ Ｐ Ｍ 敏 感 。选 择 对 Ｃ Ａ Ｚ、 Ｉ Ｐ Ｍ 同时耐药 的 ８ ２株 铜 绿 假 单 胞 菌 进 行 检
［ ４］ 曾吉 ， 吴正学 ， 郗娟 ， 等． 铜绿假 单胞菌生物膜的抵抗性研究 ［ Ｊ ］ ．
中华 医院 感 染 学杂 志 ， ２ ０ ０ ４， １ ４ （ ５ ） ： ４ ９ ６～４ ９ ８ ．
测， 共有 １ ６株 金属 Ｂ 一 内酰胺 酶 阳性 （ １ ９ ． ５ ％） 。其 中 １ ４株 菌
［ 收稿 日期］ ２ ０ ０ ７ － ０ ５ — １ ２