南京林业大学森林培育学实验4
实验四 种子生活力测定
一、实验目的和要求
● 了解测定种子生活力的基本原理,并学会其操作程序。
● 测定方法:
由于各类种子的内含物不同,对试剂的反应也不相同,可分别选用不同的方法测定生活力。当前以四唑和靛蓝染色法为主,还有硒盐、碘化钾法。
● 本实验采用四唑染色法。
二、测定原理
● 四唑:2,3,5-三苯基氯(溴) 化四唑(C19H15N4Cl(Br))的简称为,为白色粉末,水溶液无色。
● 染色原理:种胚活细胞中的脱氢酶产生氢,与浸入种胚内的四唑发生作用,产生红色稳定而不扩散的三苯基甲(TPF )。
● 判断标准:凡种胚染成红色者表示有生活力,不染色的种子为无生活力的种子;不染色的部位为坏死的部位,根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。
三、材料及器具
⏹ 材料:刺槐
⏹ 器具及药品:烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等
四、方法及步骤
1. 测定样品的提取
从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子(四分法)。3次重复。同时准备部分种子作为后备。
2. 种子预处理(浸种,同发芽测定)
3. 溶液配制
● 溶液A :9.078g KH2PO4溶于1000mL 水;
● 溶液B :11.876g Na2HPO4·2H2O 溶于1000mL 水;
● 缓冲液配制:溶液A :溶液B 以2:3比例混合;
● 1%的四唑溶液配制:称取四唑1g 溶于100mL 的缓冲溶液,现配现用。
4. 取种胚、染色处理
● 剥除外种皮和内种皮,取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿;
● 记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。如取胚时由于人为因素而破坏种胚,可从后
备种子中补取;
● 种胚剥取结束后一起放入四唑溶液,使溶液淹没种仁,上浮者要压沉。置黑暗处,
保持30~35℃染色2~3h 。
5. 结果鉴定
经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上,借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。
● 有生活力:种胚和胚乳完全着色;
● 无生活力:种胚和胚乳完全不着色;
● 根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力(种胚不染色的
最大面积不超过1/4子叶末端)。
6. 种子生活力计算
生活力的百分率根据3个重复组计算,不带小数,重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同,最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。
种子生活力测定记录表
树种 刺槐 样品号 1 样品情况 良
染色剂 四唑溶液 浓 度_ 1% _____ 测试地点___ 实验室 ___ 环境条件:温度 15 ℃ 湿度 50 %
五、试验报告内容
1. 进行种子生活力测定和计算,填写种子生活力测定记录表。
2. 说明采用四唑染色法评价种子生活力的原理和判断依据。
原理:有生活力的种子活细胞内有脱氢酶,可与氧化还原反应指示剂:四唑(无色)反应而显色,被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊。可根据四唑染成的颜色和部位,区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
判断依据:判断种子有无生活力,主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及面积大小,而不完全取决于染色的深浅。染色的深浅可以区别健壮程度。即染色愈深,种子生活力愈旺盛。