实验一 3.5一二硝基水杨酸比色定糖法
实验一 3．5一二硝基水杨酸比色定糖法
【目的和要求】
1．掌握3，5一二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2．用3，5一二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
【原理】
3，5一二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。
【操作方法】
一、葡萄糖标准曲线的绘制
将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计（520nm ）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定
1．样品中还原糖的提取：准确称取2g 山芋粉，放入100ml 烧杯内，加入85％乙醇50ml ，混匀，在50℃恒温水浴中保温 30min ，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100ml 容量瓶中，用水定容，备用。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取出芋1g ，放入大试管中，加入1ml 6mol 盐酸和15ml 蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾－碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴。以
10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至100ml 。再精确吸取上述溶液10ml ，放入100ml 容量瓶中，定容，备用。
将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
还原糖％＝
还原糖毫克数×样品稀释倍
数 样品重量
×100
×100
总糖量＝
水解后还原糖毫克数×样品稀释倍
数 样口品重量
【试剂和器材】
一、试剂
（1）3´，5´一二硝基水杨酸试剂（又称DNS 试剂）：
甲液——溶解6.9g 结晶酚于15.2ml 10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取255g 酒石酸钾钠，加到300 ml 10％氢氧化钠中，再加入880 ml 1％ 3，5一二硝基水杨酸溶液。
将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天以后使用。
（2）0．1％葡萄糖标准液：准确称取100mg 分析纯的葡萄糖（预先在105℃
干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱保存备用。
（3）未知葡萄糖溶液 [冰箱保存备（4）6mol 盐酸溶液
用]
（5）10％氢氧化钠溶 液
（7）酚酞指示剂
二、器材
（1）试管和试管架 （3）铁台 架
（7）铜水浴锅 （9）铁三脚架 （11）电热恒温水浴 （13）玻璃棒
（15）72型分光光度计
（8）玻璃漏斗和烧杯 （10）量筒（10 ml 、100ml ） （12）煤气灯 （14）白瓷板
（2）碱滴定管（50 ml）。 （4）滴定管夹 （6）容量瓶(100 ml)
（6）碘化钾－碘溶液（碘试剂） （8）85％乙醇
（5）吸量管（1 ml 和2 ml ）和吸量管
【思考题】
1．比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？ 2．72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？ 1．比色测定时为什么要设计空白管？ 2．总糖包括哪些化合物？