盐酸氨基葡萄糖片的相对生物利用度及其生物等效性评价
第!$卷第%期!""+年%月
文章编号：%""+!*#*（!""+）"%"""+沈阳药科大学学报
X7,5!$U1.(!""+
Y75%Z5+
U7IF.1,7VD:-.01./W:1F816-IJ361,?.3N-FL3J0
盐酸氨基葡萄糖片的相对生物利用度
及其生物等效性评价
冷艳霞，孙
璐，邸
欣，孙毓庆
%%""%+）
（沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳
摘要：目的研究盐酸氨基葡萄糖片在健康人体内的药物动力学及相对生物利用度。方法采用液相色谱质谱质谱联用法测定了%*名健康男性受试者口服盐酸氨基葡萄糖片和盐酸氨基葡萄糖
胶囊后不同时间血浆中氨基葡萄糖的质量浓度，并求出主要药物动力学参数。结果血浆中氨基葡（$5%9"5’）和（!5&9"5*）:，（+$+5#9$%"5%）和（+++5"9$’%5$）・;?@"
相对生物利用度；生物等效性；液相色谱质谱质谱联用法关键词：氨基葡萄糖；中图分类号：B&+$
文献标识码：>
氨基葡萄糖是一种天然的氨基单糖，可以刺激软骨细胞产生具有正常多聚体结构的蛋白多糖，抑制损伤软骨的酶，如胶原酶和磷脂酶>!，并可防止损伤细胞的超氧化自由基的产生，从而可延缓骨性关节炎的病理过程和疾病的进展，改善
［%，!］
关节活动，缓解疼痛。该药的药物动力学研
照品（质量分数为&&5’A，四川宝光药业股份有限公司），法莫替丁（内标，质量分数为&&5)A，中国药品生物制品检定所），乙腈（色谱纯，山东禹王试剂厂），空白血浆（沈阳中心血站）。
)
)*(
方法与结果
实验对象
年龄!"T!#岁，体质%*名健康男性志愿者，
究国内尚未见报道。作者采用液相色谱质谱质谱联用法（;@CDCD）测定了健康受试者单剂量口服氨基葡萄糖两种制剂后不同时刻的血浆药物质量浓度，对其药物动力学进行了研究，并对制剂的生物等效性进行了评价，旨在为指导临床合理用药提供依据。
量不超过标准体质量的9%"A，身高为%+%T受试者试验前均接受全面的体检，对肝、%*"68，
肾功能进行化验测定，并进行心电图检查，结果均属正常。受试者均签署知情同意书，并经伦理委员会批准。)*)
实验方案
将受试者随机分成!组，进行双周期交叉试验。试验前!周内未服用任何药物，于试验前一日晚起禁食%!:，次日晨空腹口服受试制剂!片或参比制剂!粒（相当于盐酸氨基葡萄糖)*"8/）
（相当于盐酸氨基葡萄糖)*"8/），均用!""8;温水送下。服药!:后方能饮水，服药!、#、%":后统一进标准餐。采血期间不得离开，避免剧烈运动，禁烟酒和含咖啡因类饮料。)*+
样品采集与处理
于服药前（":）和服药后"5#、%5"、%5#、!5"、
(仪器与试药
美国E:-F87G3..3/1.公司EDHHI1.JI8K3LM
配有电喷雾离子67N-F0三重四级杆串联质谱仪，
源（ODP）以及Q61,3RIF%5)数据采集软件，;6SI1.!5"定量处理软件。E:-F87G3..3/1.DIFN-07F高效液相色谱输液泵。
受试制剂盐酸氨基葡萄糖片（四川宝光药业股份有限公司试制，批号"$"&%’，每片含盐酸氨基葡萄糖!)"8/），参比制剂盐酸氨基葡萄糖胶囊（山西中远威药业有限公司，批号!""$")"%，每粒含盐酸氨基葡萄糖!)"8/），盐酸氨基葡萄糖对
收稿日期：!""#"$"$
作者简介：冷艳霞（%&’’），女（汉族），辽宁沈阳人，硕士研究生，主要从事药物分析学研究，!"#("!)，$%&’#,-./01.231!)4%+$5678。
第*期冷艳霞等：盐酸氨基葡萄糖片的相对生物利用度及其生物等效性评价
(
由前!"#、$"%、&"%、#"%、’"%、("%、)"%、*%"%、*!"%+，臂静脉取血#,-，并立即移入经肝素处理的离心分离出血浆试管中，离心（$#%%.・,/01*）*#,/0，保存在1!%2冰箱中待测。!"#
溶液的制备
内标溶液：内标物为法莫替丁（34,56/7/08）。精密称取适量，用乙腈水（体积比为(%9$%）溶解并稀释成!#%!・-1*。:
标准溶液：精密称取盐酸氨基葡萄糖适量，用乙腈水（体积比为(%9$%）溶解并稀释制成*%%、・-1*的氨基葡萄糖!#%、#%%、*%%%、!#%%、#%%%!:标准系列溶液，冰箱（&2）内保存备用。
氨基葡萄糖及内标法莫替丁的结构式见图*。!"$
血浆样品测定色谱条件
色谱柱：美国;+805,808
%&’()
（!）/782+,&79*+,-&./01234.243,156’04.51/-&7,
（"）2,37/012/78/386/-52&8&7,
质谱条件离子源：电喷雾离子源（CDA源）；
加热毛细管温度：$%%2；鞘气（>!）流速：・,/01*；辅助气（>!）流速：・,/01*；碰撞气*!-$-（E.）压力：（HAB）电压分%"%FG4。碰撞诱导解离别为*%8I（氨基葡萄糖）和*&8I（内标法莫替丁），正离子方式检测。扫描方式选择反应监测（DJK），扫描时间：%"$L。采用DJK方式检测待测物的产物离子（!"#*)%!!"#*’!）和内标物的碎片离子（!"#$$)!!"#!#F），如图!所示。
（*#%,,@&"’,,，；-=04>?!色谱柱A"B"#!,）流动相：乙腈水（体积比为(%9$%）；流速：柱温：室温。・,/01*；%"#,-
%&’(!（=）/786/-52&8&7,（&72,37/012/78/38，%4001./7:;:;1）
取血浆样品#%%!依次加入内标溶液-，（!#%!・-1*法莫替丁溶液）*%%!:-，流动相混匀。加入乙腈*,-，涡旋*,/0，离心*%%!-，取上清液过%"!!（&%%%.・,/01*）*%,/0，,滤膜，取#%!记录色谱图。样品测定时随行作-进样，标准曲线，将待测物与内标物峰面积之比代入当日的标准曲线，计算出未知样品的质量浓度；通过判定质量控制（MH）样品（$个质量浓度双样本）是否合格来决定样品测定结果的可靠性。!"?!"’"*
分析方法确证方法专属性考察
录色谱图，其中内源性物质峰的保留时间为将一定质量浓度的标准溶液和内标溶#")#,/0；
液加入空白血浆中，依同法操作，记录色谱图，待测物的保留时间为’")&,/0，内标物的保留时间为&"%(,/0；取健康受试者口服给药后的血浆样品，同法操作，记录色谱图，如图$所示。可见空白血浆中的内源性物质不干扰血浆中氨基葡萄糖和法莫替丁（内标物）的测定。!"’"!
标准曲线制备
取空白血浆#%%!加入系列氨基葡萄糖标准-，溶液*%%!制成相当于氨基葡萄糖质量浓度为-，
・!%"%、#%"%、*%%"%、!%%"%、#%%"%、*%%%"%!:-1*的血浆样品，除不加*%%!按“!"&”条方-流动相外，
分别取’名受试者的空白血浆#%%!按-，
“!"#”条方法操作（不加内标溶液），进样#%!-记
C
沈阳药科大学学报第1G
卷
法操作，进样
葡萄糖质量浓度为横坐标，氨基葡萄糖与内标物最小二乘的峰面积比值为纵坐标，用加权（6F@1）
［G］法进行回归运算，得典型线性回归方程为：!H
"H2AMMC6。根据标6A6IJ6251KCALCJ625B!，
准曲线，氨基葡萄糖的线性范围为12A2N定量下限为12A2!・456。・456，36222A2!31ALAG
精密度与准确度测定
取空白血浆
高、中、低G个质量浓度（相当于氨基葡萄糖质量的O@样浓度分别为
［B，
。分析方法符合有关国际规范要求
:;
取空白血浆
入外，按“1ALA1”条方法制成低、中、高G个质量浓度（氨基葡萄糖血浆质量浓度分别为
和
的样品，进样
!—"#$%&’#$()$；"—*#$()$(’+&,-.+/012!3・456783#9:
（"）$%-?8$)7/+-+%,（#）；@—*#$()$($)’#,6A20$8/,=$%7=$#-7(,78BC2)33#9:;7($)+%,0D-=7;0#7=+-,/7$0,$#/0DE7#9%/,,=!"#$%
&’()*+,)#(+*)-#./0)1+*"23+24"2,3(2+.1,+24+(4
>+5.3?
・456）F3（
1226222
（789）10+2*)435613.30,34(3+0,")2*)2",)("2#
・456）F3),$%（
BCA6
12GAI62BB
回收率为M
血药质量浓度时间曲线绘制
根据所测得的数值绘制血药质量浓度时间曲线，6C名受试者口服受试制剂盐酸氨基葡萄糖
QRFP5GAM6ACBAB
（+%/,=-$D）Q?SFP
GACBA2GAI
（T,/.,,%-$D）Q?SFP
BA6BACCA1
>’3@(30"1")2+24+00/(+06)-,’3A&9797*3,’)4,)43,3(*"23#./0)1+*"23"2@.+1*+
#6C6C6C
第.期冷艳霞等：
盐酸氨基葡萄糖片的相对生物利用度及其生物等效性评价
-
片和参比制剂盐酸氨基葡萄糖胶囊后，平均药时曲线见图!。
值、!/01和!/01均无显著性差异。采用双单侧检验
和（.7+）置信区间法分析，34567.+和!/01的!.、"!—"#$%；"—&#’#(#)*#
!"#$%&’()(*+,-*.)*/0+/(+12*1"0+31")(04#-5/0.*)"+(
*41(2*+02*-60.(04%78)#1(.1402)5-*1"0+*+62(4(2(+/(402)5-*1"0+
9:;数据处理
+,-,.
药物动力学参数计算
!/01和!/01采用实测值；
以半对数作图法，由消除相的质量浓度点计算"#和!.2+；采用梯形法计算34567!值和345678值。.9名受试者口服受试制剂盐酸氨基葡萄糖片和参比制剂盐酸氨基葡萄糖胶囊后，氨基葡萄糖的主要药物动力学参数见表+。
&*
&’()*"+,’*2)*/0="+(1"/,*2*)(1(2.04#-53
/0.*)"+(1(.1402)5-*1"0+*+62(4(2(+/(402)5-*1"0+*41(2*+02*-60.(04%78)##-5/0.*)"+(’>620/’-02"6("+?7’(*1’>
@0-5+1((2.（#!A"）:0(0/#%#($"#$%&#’#(#)*#!/012;
+,-=6,9!/01（2!?・@7.）A.,
6,->=6,+66,>+=6,++34567.+（
2!?・;・@7.）.9-A=96-,>.-A>=9B9,+345678（2!?・;・@7.）.-!6=96>,++6A,.
#2C
-A,9=-,>
+,-,+生物等效性评价
将.9名受试者服用+种制剂后的主要药物动力学参数对数变换后进行方差分析。结果显示，+种制剂中氨基葡萄糖的34567.+值、
345678!+值均大于!（.76,6B），拒绝不等效假设。受试制剂34567!的-6C置信区间为参比制剂的-+,!CD.66,BC，!/01的-6C置信区间为参比制剂的-.,6CD.6>,+C。表明受试制剂与参比制剂生物等效。
B讨论
氨基葡萄糖是小分子化合物，易溶于水。但
进行氨基葡萄糖的药物动力学研究存在一定的难度，这主要是因为氨基葡萄糖在体内很快被用于其他成分的生物合成，因此不易作为母体化合物
被发现。根据国外文献报道
［A，>］
，目前用于测定血浆仔氨基葡萄糖的方法灵敏度都较低，且操作步骤繁琐。作者首次建立了@5EFEF法测定人血浆中的氨基葡萄糖。
在进行色谱条件优化时，分别采用了59、5.9
和氨基色谱柱，发现氨基葡萄糖在59和5.9柱上无保留，而在氨基柱上以乙腈水（体积比为>6G
为流动相时，氨基葡萄糖峰与内源干扰峰分离良好。在质谱条件优化时，提高鞘气及辅助气的流速可以增加样品的稳定性和相应值，鞘气和辅助气流速分别加至.+@・/H)7.和
.］IJK0)#%$L3，M#NO#%PQRS，T#OJP;RS，$!%&UV1K#(H/#)%0W
$%JOXQ’%;##’’#*%Q’?WJ*Q$0/H)#;XO(Q*;WQ(HO#Q)/#%0YQWH*0)O(#K0H(K(Q*#$$#$H)*Q))#*%HZ#%H$$J#$%(J*%J(#$［[］UVP$K\WH)]0(/0PQW，
+66+，AB（A）：A>7A-U+］@J]，^JQ_UF%JOXQ)%;#(QW#Q’?WJ*Q$0/H)#;XO(Q*;WQ(HO#
H)%;#K0%;Q?#)#$H$Q’Q$%#Q0(%;(H%H$［[］U‘#HF;#)?a0)[HJ，+66U
干问题［[］U药物分析杂志，.--A，.A：
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B］F;0;S:，EHO;0\\，_JW$#[T，$!%&UMHQ0)0WX%H*0W/#%;QO$
Z0WHO0%HQ)b0(#ZH$H%dH%;0O#*0O#Q’K(Q?(#$$［[］U:;0(/&#$，+666，.>：.BB.7.BB>U
（下转至第BC页）
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第L期郝艳丽等：盐酸拓扑替康脂质体的体外细胞毒及体内抗肿瘤作用
O=
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