单克隆抗体制备细胞融合实验操作步骤
脾细胞融合
培养基：
RPMI(500ml)：无血清和其它添加物
融合培养基（无HAT）：
RPMI（500ml），2mM 谷氨酰胺, 1×NEAA（非必需氨基酸），1×丙酮酸钠，15％FBS（胎牛血清），1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI
选择培养基－1（含1×HAT）：
RPMI（500ml），2mM 谷氨酰胺， 1×HAT，1×NEAA（非必需氨基酸），1×丙酮酸钠，15％FBS（胎牛血清），1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI
选择培养基－2（含2×HAT）：
(每次融合15个板需150ml)
RPMI（ml），2mM 谷氨酰胺，2×HAT，1×NEAA，1×丙酮酸钠，15％FBS，1×青链霉素溶液，1％杂交瘤克隆因子，1×OPI
脾细胞处理：
1 应用无菌技术从免疫的兔子身上取出脾
2 在100mm 的培养皿中，把脾浸在10ml 不含血清的RPMI培养基中（培养基需是刚从4℃冰箱拿出），并用筛网分离脾细胞。
3 转移所有的脾细胞到一支50ml的离心管中，并用10ml不含血清的RPMI培养基洗培养皿以收取更多的细胞。
4 离心使细胞沉下来，弃去上清，以20ml不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞，让团块下沉下来，并把不下沉的细胞转移至一支新的50ml的离心管中。
5 离心使细胞沉下来，以20ml不含血清的RPMI培养基清洗细胞。再离心一次，以20ml不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞，并计数。
66 取300×10脾细胞用于一次融合。
同用于融合的骨髓瘤细胞
1 通过离心，收集融合同用的细胞
2 弃去上清，并以20ml不含血清的RPMI培养基重悬以洗细胞。再离心，以20ml不含血清的RPMI培养基重新悬浮细胞，并计数。
63 取30×10细胞。
融合
1 把兔子脾细胞与融合同用的细胞混合在一支50ml的离心管中，并加不含血清的RPMI培养基至30ml。
2 离心下细胞，尽可能地从管壁吸去培养基。轻轻用移液器（最小程度）吹细胞小球块，使其松开。
3 加1ml PEG，加的过程需大于1分钟。加PEG时，旋转50ml的离心管使细胞混合好或轻柔地用枪头混合细胞（不用吹打）。
4 静置细胞1分钟。
5 按2分钟的时间加1ml不含血清的RPMI培养基；按5分钟的时间加4ml不含血清的RPMI培养基；按5分钟的时间再加5ml；按5分钟的时间再加19ml（培养基量和PEG量总共为30ml）。在加培养基的过程中，旋转离心管，轻柔地混合混合细胞。
6 离心细胞，1000rpm，10分钟，吸出培养基。加1ml融合用培养基（不含HAT），轻轻吹散成小球，轻柔用移液器弄散大的细胞团块（要注意不能来回吹打！！！）。加培养基使细胞悬浮在30ml的融合培养基中。再重复前面操作一次，不能来回吹打！旋转离心管以去掉团块。
7 在两个50ml的离心管中分别移入10ml的第6步完成的培养基（总共有3个50ml的离心管）。把融合培养基每管加至48ml（不合HAT，3管总量为144ml）。
8 取15块平底的96孔培养板，每孔加100ul进行培养。
9 培养48小时后，以每孔加入新鲜的100ul选择培养基－2（含2×HAT），这样每为1×HAT含量。
10 每隔4～5天，更换新鲜的培养基：先吸出大约100ul／每孔的培养基，再加入100ul／每孔的新鲜的选择培养基－1。
11 在2～5周通常能见到克隆群。上清可用于ELISA测定以检测抗体的存在。