解读四大有机物的鉴别

解 读 四大有机　

◇徐 新 跃　

还 原糖 的 鉴定 原理　

一 、

生 物组 织 中 普遍 存 在 的 可 溶性 糖 种　

类 较 多 ，常 见 的有 葡 萄 糖 、 果糖 、麦 芽　

糖 和蔗 糖 。前三 种 糖 的 分 子 内都 含 有 游　 离 的具 有 还 原 性 的半 缩 醛羟 基 ，因 此 叫　

做 还 原 性糖 ；蔗 糖 的 分 子 内没 有 游 离 的　

半缩 醛 羟基 ， 因此 叫 做 非还 原 性 糖 ， 它　

不 具有 还 原性 。实 际 上在 实 验 中 ，用 斐　 林 试 剂 只 能检 验 生 物 组织 中可 溶 性 的还　 毫 升 加 热 煮 沸 ， 若 不 变 色 加 入 尿 液 两　 原糖 存 在 与 否 ，而 不 能 鉴定 可 溶 性 的 非　 滴 ， 再 煮沸 １至 ２分 钟 ，冷 却 后观 察尿　 还 原性 糖 。 　 斐 林 试 剂 由质 量 浓 度 为 ０ １／Ｌ的　 ． ｇｍ 液 颜 色 的变 化 。若尿 液 仍 呈 蓝 色 为 阴性　

（ ；若 为 绿 色 无沉 淀 是 微 量 （ ；若　 一） ±）

氢 氧 化 钠 溶 液 和 质 量 浓 度 为 ００ ｇｍ　 呈 黄 绿 色 且 浑 浊 为 （ ； 若 呈 黄 色 为　 ．５ ／Ｅ ＋） 的 硫 酸 铜 溶 液 配 制 而 成 ，二 者 混 合 后 ， （ ＋） 　 ＋ ；若 呈橘 红色 则是 （ ＋＋ ） ＋ ；呈　

立 即生 成 淡蓝 色 的 ｃ ０） ｕ（Ｈ　沉 淀 。 Ｃ 　 砖 红 色 为 （ ＋＋ ＋）　 ｕ ＋ 。

（Ｈ ， 加 入 的葡 萄 糖 在 加 热 的 条件 下 ， ０ ）与 　

能 够生 成砖 红 色的 Ｃ， 沉 淀 ，而 葡萄 糖　 ｕ０

二 、蛋 白质 的鉴 定 原理　 鉴 定 生 物 组 织 中 是 否 含 有 蛋 白 质　

本 身氧 化 成 葡 萄糖 酸 。用 斐林 试 剂 鉴 定　 剂 。 双 缩 脲 试 剂 的 成 分 是 质 量 浓 度 为　 可溶 性 还 原糖 时 ，溶 液 的颜 色 变 化 过 程　 ０ １／ Ｌ的氢 氧化 钠 溶 液 和 质 量 浓 度 为　 ． ｇｍ 为 ：浅蓝 色 一棕 色 一砖 红色 （ 淀）　 沉 。 ０Ｏ ｇｍ ． ｌ／ Ｌ的硫 酸 铜 溶 液 。 在 碱 性 溶 液　 班 氏试 剂 配制 方 法 ：取 结 晶硫 酸 铜　

（ｕＯ ・Ｈ０ １． ＣＳ　 ５ ，） ７３克 溶解 于 １０毫 升 热　 ０ （ａ Ｈ 中 ，双 缩 脲 （　 ｏ —ＮＩ Ｏ ｝ ） Ｎ Ｏ） ＨＮ Ｃ ｝ —ｃＮＩ 　 。

时 ，常 用 双缩 脲 法 ， 使用 的是 双 缩 脲 试　

ｕ作 的 蒸 馏 水 中 ， 冷 却 后 ， 稀 释 至 １ ０毫　 能 与 ｃ ， 用 ，形 成 紫 色 或 紫 红 色 的融　 ５

升 ，此 为第 一 液 。 将柠 檬 酸 钠 １３克和　 合物 ，这 个 反应 叫做 双 缩 脲 反应 。 由于　 ７ 无 水 碳 酸 钠 １０克 加 蒸 馏 水 ６ ０毫 升 ， ０ ０ 　

蛋 白质 分 子 中 含有 很 多 与 双 缩脲 结构 相　 加 热 使之 溶 解 ，冷 却后 ，稀 释 至 ８ ０毫　 似 的肽 键 ， 因此 ，蛋 白质都

可 与 双 缩 脲　 ５

升 ， 此 为第 二 液 。最 后 将 第 一液 缓 慢 倒　 试 剂 发 生颜色 反应 。 　

入 第 二液 中， 混匀 后用 细 口试 剂 瓶 贮 存　

备用　

三 、脂 肪 的 鉴定　

做 鉴 定脂 肪 的实 验 ，可 选 用 苏丹 Ⅱ　 Ｉ

尿 糖 试验 操作 方 法 ：取 班 氏试 剂 ２ 　 或 苏丹 Ⅳ染 液 。 苏 丹ｍ 染 液 遇脂 肪 的颜　 Ｏ

Ｉ０ ｌ　

售ｌ■ｔ 　

色 反应 为橘 黄 色 ，苏 丹 Ⅳ 染 液 遇 脂 肪 的　 色 ， 遇 甲基 绿被 染成 蓝 绿 色 ，且 颜 色 的　

颜 色 反应 为红 色 。因 苏 丹 Ⅳ 染 液 与 脂 肪　 深 浅 与 Ｄ Ａ纯 化 程 度 有 关 。用 紫 外 灯 照　 Ｎ 的亲 和 力 比较 强 ， 所 以 染色 的 时 间 应 比　 射 法 鉴 定 Ｄ Ａ效 果 很 好 。具 体 鉴 定 方 法　 Ｎ 较 短 ，一 般 为 １ 钟 左右 。 分 　 四 、ＤＮＡ 的提 取 与 鉴定　

如下。 　

（） 制 染 色 剂 。 用 蒸 馏 水 配 制 万　 １配

１实 验材 料 必须 准备 充 足 。本 实 验　 分 之 五 的溴 化 乙 锭 （Ｂ 溶液 。 ． Ｅ） 　 所 用 的 实 验材 料是 鸡 血 细 胞 液 ， 由活 鸡　 必 须提 前 放 入抗 凝 剂 。 　 （） 玻 璃 棒 上 缠 绕 的 白 色 絮 状 物　 ２将

（） 蜡 纸 放 在 紫 外 灯 （６ ｎ ） ３将 ２ ０ ｍ 下照　 的鲜 血 经 沉 淀 后 获得 。取 鸡 血 的烧 杯 中　 抹 于 蜡 纸上 ，再 滴 １ Ｅ 溶 液 染色 。 滴 Ｂ 　 ２ 盛放 鸡血 细胞 液 的 容 器 ，最 好 是　 射 （ 室 中） ． 暗 ，可 见 橙 红色 的荧 光 （ｒ Ｄ ｇ的　 ｑ 塑料 容 器 。鸡 血 细 胞 破 碎 以后 释 放 出 的　 紫 外 吸收 高 峰在 ２ ０ ｍ处 ）　 ８ｎ 。

ＤＡ 容 易 被 玻 璃 容 器 吸 附 ， 由 于 细 胞　 Ｎ，

容器 吸 附去 一 部 分 ，提 取 到 的 Ｄ Ａ就 会　 Ｎ

进 行 以上 实 验 时 ，我 们 应 记 住 以下　 ① ２次 用 蒸 馏 水 ：蒸 馏 水 破 膜 提 取　

内 Ｄ Ａ的 含 量 本 来 就 比较 少 ，再 被 玻 璃　 几 点要 点 ： Ｎ 　 Ｎ。 更少 。因 此 ， 实 验 过 程 中 最 好 使 用 塑 料　 核 物 质 和 蒸 馏 水 稀 释 析 出 ＤＡ ② ３次　

的烧 杯 或 试 管 ，这 样 可 以 减 少 提 取 过 程　 过 滤 ：过 滤 核 外 物质 ， 过 滤 Ｄ Ａ 过 滤　 Ｎ，

中 Ｄ Ａ的损 失 。 Ｎ 　

Ｄ Ａ核 蛋 白 。③ ５次 搅 拌 ： 第 ｌ 同 方　 Ｎ 步

３获取 较 纯净 的 ＤＡ的关键 步骤 。 ． Ｎ 　

向 加 力 搅 拌 ， 第 ３ ５步 同 方 向轻 缓 搅 　 、 （） 分 搅 拌 鸡 血 细 胞 液 Ｄ Ａ存 在　 拌 ，第 ７步 同 方 向缓 慢 搅 拌 ， 第 ８步 可　 １充 Ｎ

于 鸡 血 细 胞 的 细 胞核 中 。将 鸡 血 细 胞 液　 不 同 方 向搅 拌 。 ④ ７种 探 究 模 式 ：本 实　

与 蒸 馏 水 混 合 以 后 ， 必须 用 玻 璃 棒 沿 一　 验 可 尝 试 性 拓 展 为探 究性 实验 ， 改 型后　

个 方 向快 速 搅 拌 ， 使 鸡 血 细 胞 加 速 破　 主 要 参 考 课 题 有 （） 究 使 用 鸡 的 不 同　 ａ探

裂 ， 并释 放 出 Ｄ Ａ　 Ｎ。

组 织 材 料 进 行 实 验 时 的 实 验 效 果 。 （） ｂ　

（） 淀 Ｄ Ａ时 必 须 用 冷 酒 精 ，在　 探 究 蒸 馏 水 量 引 起 的鸡 血 细 胞 在 不 同低　 ２沉 Ｎ 实 验 前 准 备 好 大量 的 体 积 分 数 为 ９ ％ ５ 的　 渗 状 态 下 的 破 裂 程 度 。 （ ） 究 Ｄ Ａ在　 ｃ探 Ｎ 酒精 ，并 在冰 箱 中存 放 ２ ４小 时 （ 少　 不 同质 量 分 数 氯化 钠 溶 液 中 的溶 解 度 并　 至

５ 以下）　 ℃ 。

绘 出 曲线 图 。 （） 究 Ｄ Ａ鉴 定 过 程 中 ｄ探 Ｎ 　 （） 确 搅 拌 含 有 悬 浮 物 的 溶 液 实　 不 同水 浴 温 度 对 显 色 的 影 响 。 （） 究　 ３正 ｅ探

沉 淀 Ｄ Ａ时 不 同 温 度 的 酒 精 对 沉 淀 量 的　 Ｎ 影 响 。 （） 究 过 滤 过 程 中 纱 布 层 数 对　 ｆ探

验 步骤 ３ 、７ 都需 要 用 玻璃 棒 搅 拌 。 、５ ， 　

注 意 在 进 行 步 骤 ３ ５时 ，玻 璃 棒 不 要　 、

直 插 烧 杯 底 部 ，而 且 搅 拌 要 轻 缓 ， 以便　 最 终 提 取 物 量 的 影 响 。 （） 究 使 用 玻　 ｇ探

获 得 较 完 整 的 Ｄ Ａ分 子 。 进 行 步 骤 ７ 璃 烧 杯 、试 管 与 使 用 塑 料 制 品对 Ｄ Ａ提　 Ｎ 　 Ｎ 　 时 ， 要 将 玻 璃 棒 插 入 烧 杯 中 溶 液 的 中　 取 量 的 影 响 。 间 ，用 手 缓 慢 转动 ５到 ｌ 分 钟 。 Ｏ 　 ４Ｄ Ａ鉴 定 。 二 苯 胺 或 甲 基 绿 鉴 定　 ．Ｎ （ 者 单位 ：湖 南省 耒 阳 市 第二 中学） 作 　 编 辑 ／牛 萌 　 Ｅ ｍ ｉ ｄｘ ｌ ｏ ２ ． ｍ　 — ａ ： ｊ— ｏ ＠￣ ６ｃ ｌ ｊ ｏ

法 即 Ｄ Ａ遇 二 苯 胺 （ 水 浴 ） 染 成 蓝　 Ｎ 沸 被