"红宝石"萱草的组织培养

“红宝石”萱草的组织培养

摘要：采用“红宝石”萱草幼嫩花茎做为外植体，接种在不同培养基上，研究不同浓度的NAA和6BA对于外植体生长的影响，并探索了最适于产生愈伤组织和生根的培养基配方。

关键词：萱草 组织培养愈伤组织

Abstract: use “ruby” day lilies tender stems as explants, inoculation in different medium, different concentrations of NAA and 6 ba on the influence of the explant grow, and explores the most suitable for callus and rooting medium formula.

Keywords: day lilies callus tissue cultures

1材料与方法：

1、1外植体：选用无病虫害植株的幼嫩花茎。

1、2消毒：外植体在自来水冲洗15—20min ,在无菌条件下70%酒精消毒30s，无菌水冲洗一次，0.1%升汞溶液消毒3—4分钟，无菌水冲洗4—5次。

1、3培养基：（1）MS﹢6BA1.0mg/L﹢NAA0.2mg/L（2）MS﹢6BA2.0mg/L﹢NAA0.4mg/L （3）MS﹢6BA3.0/mgL﹢NAA0.2mg/L （4）MS﹢6BA4.0mg/L﹢NAA0.4mg/L（5）MS﹢6BA5.0mg/L﹢NAA0.4/mgL 以MS为基本培养基，在培养基中加食用砂糖3%，琼脂3.5%，PH值5.8—6.0。

1、4增殖培养

1.4.1 分别接种于愈伤组织诱导培养基1、2、3、4、5，每个处理15瓶，每瓶接种3块花茎。30d后统计出愈率，并将愈伤组织继代于相同的培养基，20d后观察继代愈伤组织的生长情况。

培养条件：接种后置于光照培养箱内，25℃恒定培养，光照度2000Lx,光照时间12/d.

（一）、不同培养基上红宝石萱草愈伤组织的诱导和继代后的分化情况

编号1：接种数（段）:30；出愈率81%；生长情况：愈伤组织淡黄色，瘤状，继代后分化少量芽，黄绿色；丛芽增殖倍数（倍）：0.

编号2：接种数（段）:30；出愈率83%；生长情况：愈伤组织淡黄色，瘤状，继代后不分化芽，有大量愈伤产生；丛芽增殖倍数（倍）：0.

编号3：接种数（段）:30；出愈率100%；生长情况：愈伤组织淡黄色，瘤

状，继代后个别分化出苗。；丛芽增殖倍数（倍）：＜1.

编号4：接种数（段）:30；出愈率100%；生长情况：愈伤组织淡黄色，瘤状，继代后个分化出少量芽；丛芽增殖倍数（倍）：1.

编号5：接种数（段）:30；出愈率100%；生长情况：愈伤组织淡黄色，瘤状，继代后分化出大量黄绿色芽；丛芽增殖倍数（倍）：5-10.

从中看出，5种培养基诱导培养基的愈伤组织诱导率均在80%以上，在不同激素配比下，均形成瘤状愈伤组织。1号培养基的愈伤组织继代于相同的培养基上，没有芽的分化。2号产生大量愈伤组织，适合诱导愈伤组织。3、4号培养基产生的愈伤组织继代于相同的培养基均能分化出少量的芽和苗，但芽的增殖倍数很低。5号培养基能分化出大量丛生芽，丛生芽的增殖倍数为5—10倍，适合快速繁殖。

1.4.2温度条件对增殖效果的影响。

在选定的培养基中，接入丛生芽式愈伤组织块，每瓶接种3块（株）分别置于培养箱、培养室，在22-23℃ 、 25-26℃ 、 27-28℃温度条件下培养，20d天后观察增殖效果。

（一）、不同温度对红宝石萱草生长的影响

1、温度：22℃—23℃，接种数（块）：60，增殖倍数（倍）：0，生长情况：没有分化，愈伤组织逐渐发褐，叶片发黄。

2、温度：25℃—26℃，接种数（块）：60，增殖倍数（倍）：5-8，生长情况：愈伤组织增加，分化丛芽多。

3、温度：28℃—29℃，接种数（块）：60，增殖倍数（倍）：2-4，生长情况：愈伤组织增加，少量分化芽，玻璃化严重.

从实验过程观察，萱草生长属于温度敏感型，当温度为22-23℃是，愈伤组织和植株上无增殖率，从生长过程观察，愈伤组织逐渐发褐，植株上的叶片由外向里死亡，随着温度的升高，当温度25-26℃时，愈伤组织块增殖倍数和分化倍数达最大，当温度为27-28℃时，植物形成不定芽的量达最高，但玻璃化严重。

1、5生根培养

外源的激素处理对生根的影响非常明显，当无根苗在培养基中，经15天培养，不同激素浓度生根率，每株平均根数，平均根长都不相同。生根培养基（6）1/2MS﹢NAA0.2mg/L（7）1/2MS﹢IBA0.6mg/L （8）1/2MS﹢NAA0.4mg/L （9）1/2MS﹢IBA0.4mg/L在培养基中加食用砂糖15%，琼脂3.5%，PH值5.8—6.0。

选用基本培养基为1/2MS，分别附加IBA、NAA,进行比较试验，将增殖培养基中的无根丛生芽接入生根培养基，每瓶5株，每个培养基接苗30瓶。

培养条件：置25℃的光照培养箱内培养，光照12h/d，光强1800LX。

（一）、红宝石萱草生根不同激素浓度处理情况

1、生根培养基：6；生根株数：93；生根率（%）：62%；每株平均生根数：2；平均根长（cm）：0.3。

2、生根培养基：7；生根株数：138；生根率（%）：92%；每株平均生根数：

4.1；平均根长（cm）：1.1。

3、生根培养基：8；生根株数：144；生根率（%）：96%；每株平均生根数：

4.3；平均根长（cm）：0.7。

4、生根培养基：9；生根株数：123；生根率（%）：82%；每株平均生根数：

3.5；平均根长（cm）：0.43。

从以上结果可知，NAA为0.4时，生根率最好，为96％，但苗根数为4.3个，根长0.7㎝，苗基部愈伤组织较多，根粗、短，肉质化程度较高。其次是IBA0.6时，生根率92％，平均根数4.1，根长1.1㎝，根细，木质化程度高，苗基部无愈伤组织，IBA还促进苗向上生长。最优选择IBA0.6为生根的浓度。

移栽10后，初步统计成活率，NAA0.4（90.1％）；IBA0.6（97％），移栽20天后NAA0.4（78％），IBA（94％）。NAA0.4，根部腐烂，根发褐现象严重，由以上数据可知，在NAA的作用下，再生苗基部产生的愈伤组织会影响植株对营养物质吸收，而粗壮的肉质根恢复能力较差。因此，对移栽有影响，故最佳生根培养选择IBA（0.6）。

2、结论

建立红宝石萱草快繁体系流程为：幼嫩花茎在MS﹢6BA2.0mg/L﹢NAA0.2mg/L﹢糖30g/L﹢琼脂粉3.5/L培养基上进行愈伤组织诱导与增殖；在MS﹢6BA5.0mg/L﹢NAA0.4mg/L﹢糖30g/L﹢琼脂粉3.5/L培养基上进行愈伤诱导丛芽；在1/2MS﹢IBA0.6mg/L﹢琼脂粉3.5/L﹢糖15g/L培养诱导生根；最适培养温度为25-26℃。