人脂肪干细胞的分离和成脂诱导及鉴定
人脂肪干细胞的分离和成脂诱导及鉴定
周丽薇
(四川大学化工学院 四川成都 610000)
摘要:人的脂肪干细胞是来源于脂肪组织的干细胞,具有自我更新及多向分化的能力,在适宜诱导条件下可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等。目的:从人脂肪组织中分离出脂肪干细胞,检测人脂肪干细胞的分化能力。方法:分离出的脂肪干细胞经成脂诱导后,用油红O染色和流式细胞术对已分化脂肪细胞进行鉴定。结果:检测细胞表面抗原CD34-和CD90+的比例,油红O染色鉴定脂肪细胞。
关键词:间充质干细胞 脂肪干细胞 成脂诱导 成脂分化中图分类号:R318文献标识码:
A
文章编号:
1674-2060(2015)11-0013-02
Abstract:
Human adipose-dervied stem cell derived from adioose tissue has the ability of self-renewal and multi-directional differentiation,under the
condition of appropriate induction can differentiate into adipose cells,osteoblasts,chondrocytes.Purpose:isolated adipose stem cells from human adipose tissue and
detected the differentiative capacity of adipose-dervied stem cell. Method: isolated adipose stem cells after induced into adipose tissue ,oil red O staining and flow
cytometry for appraisal has polarized adipose cells.
Key Words:
mesenchymal stem cell adipose-dervied stem cell induced adipogenesis adipogenic differentation
1 前言
间充质干细胞是由一组不同分化潜能的细胞组成的。MSC存在于多种组织,主要包括骨髓、脂肪组织、骨骼肌、肝脏、皮肤结缔组织、胚胎组织、脐带、脐血及外周血等。由于MSC具有多向分化潜能,在一定实验条件诱导下可向不同胚层的细胞分化[1]。2001年,Zuk[2]等从抽脂术废弃的脂肪组织中,分离出脂肪干细胞,并证明这种丰富且能再生的组织可作为未来组织工程的细胞来源。
体外实验显示在特定培养条件下,MSC可分化为中胚层起源的成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞等。本文通过体外培养的方法从脂肪组织中筛选出ADSCs[3],进一步研究脂肪干细胞体外分离培养的方法,并进行染色和表面抗原鉴定,为ADSCs相关研究提供参考。
0.1% I型胶原酶;Ul troser-G,PALL;L-Glu ,GIBCO;0.25%胰酶,Life;地塞米松, SIGMA;IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤);油红O;异丙醇;75%酒精。
2.3 ADSCs分离和培养
收集脂肪组织后,加入等体积的PBS,2000rpm,5min离心,吸弃中间盐水层,保留上层脂肪层和下层沉淀,重复离心2遍,保留上层脂肪层和下层沉淀细胞。向含有脂肪层的离心管中加入等体积的0.1%I型胶原酶,37℃,水浴8min,加入等体积PBS终止消化,2000rpm,5min离心,吸弃中间盐水层,保留上层脂肪层和下层沉淀,重复消化离心3遍,最后弃去上层脂肪层。将两次收集到的沉淀合并,用PBS洗一次,离心弃上清。用注射用水裂解红细胞,离心收集沉淀。取3×106个细胞接种到T175 cm2 细胞培养瓶中,用含有2% Ultroser-G和1% L-Glu的DMEN/F-12培养,24h,次日收集细胞液,下层贴壁细胞为成纤维细胞,将细胞液重新接种到新的T175 cm2 细胞培养瓶中,隔三天换液一次,培养期间根据细胞生长情况传代,培养到第14天时收获细胞[4]。
2 材料与方法:
2.1 样品来源:人腹部抽脂50ml2.2 试剂
PBS(磷酸盐缓冲液),Hyclone;DMEM/F-12 1:1,Hyclone;
3 ADSCs成脂诱导
用细胞培养液调整细胞浓度为2×104个/ml细胞,接种6孔板,24小时后全量更换为成脂诱导液。每3天全量换液一次,成脂诱导2周。成脂诱导液:IBMX 50mM,地塞米松0.1mM,溶于细胞培养液中,4℃保存备用[5]。
4 ADSCs 的鉴定
4.1 流式细胞术检测细胞表型:
细胞表面抗原的检测,成脂诱导前收集5×106个细胞,离心,用PBS重悬洗2次,加入含有PE和FITC标记的抗体CD34-、CD90+[6]在4℃下孵育30min,然后用PBS洗1次。在流式细胞仪上检测细胞表面抗原。
4.2 油红O染色鉴定
脂肪干细胞诱导为脂肪细胞的鉴定一般用油红O染色,油红为脂肪染色剂,易溶于脂质,染色后脂质呈红色,细胞核呈淡蓝色。将
图
1
油红O 0.5g溶于100ml异丙醇。染料与蒸馏水按3:2稀释。用0.22滤
作者简介:周丽薇(1983-),女,汉族,四川成都市人,硕士研究生,四川大学化学工程学院。
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