引物稀释方法
05-15
引物稀释方法
PCR 引物稀释方法(-S 为上游引物,-A 为下游引物):
1. 按照管壁上的nmol 数加入10倍的灭过菌的纯化水稀释成100nmol/mL
2. 各取上游引物(***-S)10uL ,下游引物10uL 加入到80uL 灭过菌的纯化水中稀释成10nmol/mL
3. 取稀释好的引物混合液2uL 做PCR (25uL 体系)
定量PCR 操作步骤参考
(以FastStart Universal SYBR Green Master(Rox) Roche为例)
1)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系
2×qPCR Mix 12.5μl
2.0μl
2.5μl
8.0μl 7.5μM 基因引物 反转录产物 ddH 2O
2)PCR 扩增
预变性 95℃,10min
95℃,15s →60℃,60s
60℃,5min
75℃→95℃,每20s 升温1℃ 循环(40次) 末段延伸 溶解曲线