EP 灭菌生物指示剂
5.1.2 Biological indicators of sterilization 灭菌生物指示剂
01/2001: 50102 EP7.0 page 504‐505 翻译日期：2012年12月
生物指示剂采取选定的微生物用标准方法制备而成，用于评估灭菌程序的有效性。生物指示剂通常用适当的惰性载体放置一定数量的细菌孢子。载体经过良好的覆盖能确保不受损坏或污染，而同时能使灭菌介质进入与微生物接触。孢子混悬液可以用密封安瓿瓶放置。生物指示剂经过适当的方法制备后，可在定义条件下储存，并给予有效期。
可采用与生物指示剂制备用细菌同物种（species ）的细菌，直接接种到待灭菌的液体产品或与待灭菌产品类似的液体产品。这种情况下，要证明液体产品对所使用的孢子，尤其是其生长，没有抑制作用，
生物指示剂的性质确认通过用于对照微生物的细菌种属名称、原始收集中菌株的数量，每个载体中活孢子的数量及D 值。D 值指 需要将活性微生物降低到原始值1/10的灭菌（时间或吸收剂量）参数值（The D ‐value is the value of a parameter of sterilization (duration or absorbed dose) required to deduce the number of viable organism to 10 percent of the original number. ）D 值只有在定义的实验条件下才有意义。只能采用明确说明的微生物。可能会使用在同一载体上有多种细菌的生物指示剂。需提供培养基和培养条件的信息。
建议指示剂放置在假定位置，或者如果可能，放置在经过物理测量至少能接触到灭菌介质的位置。暴露在灭菌介质后，要采用无菌技术将孢子载体转移至培养基中，以保证不会在检查过程中造成污染。也可以采用包装中直接放置培养基安瓿瓶以保护载体的生物指示剂。 指示剂微生物选择如下：
a ） 检测菌株的耐受性适合某种灭菌方法，且与潜在污染产品的微生物耐受性有良好的可比性；
b ） 检测菌株没有致病源；
c ） 测试菌株易于培养。
经过培养，如果经过某种灭菌程序后对照微生物长菌，说明该程序不合格。、
蒸汽灭菌 灭菌循环验证建议使用用于蒸汽灭菌的生物指示剂。建议使用嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（Geobacillus stearothermophilus ）（例如，ATCC7953，NCTC10007，MCIMB8157，或CIP52.81）或其他经过证明等效的微生物菌株。活孢子数量每个载体超过5×105个。121℃下D 值不小于1.5分钟。已经确认将生物指示剂放置在121±1℃下6分钟可以复活，在121±1℃下15分钟对照微生物没有生长。
干热灭菌 建议使用萎缩芽孢杆菌（bacillus atrophaeus ）孢子（例如，ATCC9372, NCIMB8058 或CIP77.18）或其他经过证明等效的微生物菌株制备生物指示剂。活孢子数量每个载体超过1×106个。160℃下D 值不小于2.5分钟。玻璃器皿的灭菌和去热源经常使用超过220的温度。这种情况下，可用耐热细菌内毒素降低3个log 值代替生物指示剂。
离子射线灭菌 生物指示剂可作为附加的评估一定剂量射线的灭菌效果方法，用于日常操作监控，尤其适用于加速电子灭菌的情况。建议使用短小芽孢杆菌（bacillus pumilus ）孢子（例如，ATCC27142, NCTC10327 或CIP77.25）或其他经过证明等效的微生物菌株制备生物指示剂。活孢子数量每个载体超过1×107个。D 值不小于1、9kGy 。已经确认将生物指示剂暴露至25kGy （最小吸收剂量）对照微生物没有生长。
气体灭菌 不论是在验证循环还是日常操作，所有气体灭菌程序都需要使用生物指示剂。气体灭菌广泛使用于医疗器械、隔离器、箱等。这些使用目的已超出了EP 范围。对于环氧乙烷灭菌。建议使用萎缩芽孢杆菌（bacillus atrophaeus ）孢子（例如，ATCC9372, NCIMB8058 或CIP77.18）或其他经过证明等效的微生物菌株制备生物指示剂。活孢子数量每个载体超过1×106个。在54℃,60%RH，600mg/L的环氧乙烷检测循环中，D 值不小于2.5分钟。 已经证明生物指示剂暴露在上述条件下25分钟，对照微生物无生长。但在缩短温度循环中（30℃,60%RH，600mg/L）50分钟微生物可复活。