对氯苯肼盐酸盐的反相HPLC测定
第22卷第6期冶 金 分 析Vol. 22, No. 6
2002年12月December , 2002Metallurgical Analysis 文章编号:1000-7571(2002) 06-0036-02
对氯苯肼盐酸盐的反相HPLC 测定
潘富友
(浙江省台州学院化学系, 浙江台州 317000)
μm ,250mm ×摘 要:采用shim -pack CLC -ODS 柱(5416mm I 1D 1) , 乙腈:缓冲溶液(每升含017g 12庚磺酸钠,210mL 冰乙酸) =315:615(v/v ) 为流动相, 检测波长为233nm , 流速为1mL/min , 在5～100mg/L 浓度范围内, 在反相HPLC 中, 对氯苯肼盐酸盐的峰面积与浓度之间线性关系良好(r =019999) ,RSD 为0152%, 方法简便、准确, 结果满意。这为工业化生产中动态跟踪产品质量提供了一个快速有效的检测方法。关键词:对氯苯肼盐酸盐; 反相HPLC ; 测定中图分类号:O65717+2 文献标识码:B
对氯苯肼盐酸盐是新一代消炎镇痛药的重要起始原料。我们已报道了其合成方法[1]。由于原料中苯胺、间氯苯胺及邻氯苯胺的存在, 以及在合成过程中重氮盐的偶合和水解作用, 使产物变得非常复杂, 与此同时, 体其质量要求甚高。因此, 、要的HPLC 测定医药及其中间体的基础上[2～4], 经反复试验, 找到了对氯苯肼盐酸盐在反相(RP ) -HPLC 上分离检测的适宜条件, 经10多种流动相组成试验, 结果表明, 用乙腈:缓冲溶液(每升含017g 12庚磺酸钠,210mL 冰乙酸) =315:615作流动相, 流速为1mL/min ,
μm , 于233nm 处, 在shim -pack CLC -ODS 柱(5
250mm ×416mm I 1D ) 上, 能很好地分离主产物与副产物, 并能准确地测定其含量, 这为工业化生产中动态跟踪反应过程, 调整工艺条件, 提高产品质量提供了一个快速有效的检测方法。
甲醇、乙腈为一级色谱试剂, 水为双重蒸馏水(均经5μm 滤膜过滤) ; (经本, 多次测定纯度为μm , :shim -pack CLC -ODS 柱(5
250mm ×416mm I 1D ) , 柱温为室温; 流动相为乙腈:缓冲溶液(每升含017g 12庚磺酸钠,210mL 冰乙酸) =315:615, 流速为1mL/min ; 检测波长:233nm。113 实验方法
准确称取2510mg 对氯苯肼盐酸盐对照品, 置100mL 容量瓶中, 加适量流动相, 振摇使之溶解并稀释至刻度、摇匀; 准确量取110,310,510, 710,1010, 1510mL 溶液, 置25mL 容量瓶中, 加流动相稀释至刻度、摇匀, 选择检测波长为
μL 进样, 记233nm , 流速为1mL/min , 分别取20
录峰面积。
2 结果与讨论
211 流动相的选择
1 实验部分
111 仪器和试剂
Waters TM 600型四元梯度液相色谱恒流泵, Waters 600型液相色谱恒流泵控制器, Wa 2
ters2487型紫外检测器(美国Waters 公司) ; JL120型超声波器(上海杰理科技有限公司) ; UV -2401PC 型紫外-可见分光光度计(日本岛津公
司) 。
收稿日期:2001-08-12
按实验方法, 采用实际工业样品研究了不同流动相组成及不同流速的保留时间。结果表明, 甲醇、乙腈、甲醇-水(10:90～90:10) , 乙腈-水(10:90～90:10) 等在流速015～115mL/min 均不能有效的分离对氯苯肼盐酸盐与其中的杂质对氯苯胺盐酸盐、间氯苯肼盐酸盐、邻氯苯肼盐酸盐和苯肼盐酸盐, 只有乙腈:缓冲溶液(每升含017g 12庚磺酸钠,210mL 冰乙酸) 为315:615, 流速为
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1mL/min , 才能有效地分离, 结果见图1。212 检测波长的选择
214 精密度及稳定性
按实验方法, 以流动相空白为参比, 在紫外-可见分光光度计上绘制吸收曲线, 结果发现, 在233nm 处, 用峰面积归一化法测定的含量与外标法测定的含量基本一致, 本试验采用233nm 为检测波长。213 线性范围
按实验方法, 以对照品的含量X (mg/L ) 为横坐标, 色谱峰面积Y 为纵坐标作图, 并进行线性回归, 结果表明, 被测样品在5～100mg/L 范围内线性关系良好, 其回归方程为:
Y =42324192X -31559106,r =019999
。
准确称取同一批号样品6份, 按实验方法测定, 其RSD 为0152%(n =6) , 将同一配置样品放置015,110,215,310,315,410h 后, 按实验方法测定, 得RSD 为0160%, 放置时间超过3h , 则发现稳定性欠佳。
3 样品测定
按实验方法, 记录实际样品的峰面积, 分别以外标法及峰面积归一化法计算含量, 结果见表1。
表1 样品测定结果
T able 1 Analytical results of samples n =6, %
样品
Sample 0008013外标法E 1S 1测得值
Found [1**********]42
峰面积归一化法
Normalization method in peak area
RSD 0
测得值
[1**********]38
RSD [1**********]57
06200168
该批号为对照品, 其它为工业样品
4 结论
用本法测定对氯苯肼盐酸盐是可行的, 操作简便, 灵敏度高, 重复性好, 结果可靠。本法能快速有效地分离其杂质, 这为动态跟踪反应过程, 调整工艺条件, 提高产品质量提供了一个快速有效的检测方法; 本法建立的外标法及归一化法基本相符, 结果令人满意; 在实际样品测定中可直接使用峰面积归一化法。
参考文献:
图1 对氯苯肼盐酸盐的RP -HPLC 图
Fig 11 Chrom atogram(RP -HPLC) of p -chloro
-phenylhydrazine hydrochloride
11苯肼盐酸盐,51510min ;21邻氯苯肼盐酸盐,81119min ; 31对氯苯肼盐酸盐,91858m in ;41对氯苯胺盐酸盐,151808m in 。
[1]潘富友, 杨健国, 梁华定1应用化学[J],2001,18(12) :10011[2]潘富友, 梁华定1分析化学[J],1998,26(5) :5281[3]潘富友, 梁华定, 分析化学[J],1998,26(12) :15221
[4]潘富友, 杨健国, 梁华定, 葛昌华1冶金分析[J],2002,22(1) :
401
R eversed phase high perform ance liquid chrom atographic determination of p 2chlorophenylhydrazine hydrochloride
PAN Fu 2you
(Department of Chemistry , Taizhou College , Taizhou 317000,China )
Abstract :The RP -HPLC determination of p -chlorophenylhydrazine hydrochloride (CPH ) was carried out by using shim -pack CLC -ODS μm ,250mm ×column (5416mm I 1D 1) 1The medium of acetonitrile and buffer (017g sodium 12heptanesulfonate ,210mL glacial acetic acid in
1000mL of water ) mixed in a ratio of 3:7(v/v ) was as mobile phase 1The flow rater was 110mL/min 1The detection wavelength was 233nm 1A good linearity was obtained in the concentration range of 5-100mg/L for CPH 1The regressive equation was Y =42324192X -31559106, r =0199991The method has been used to determine CPH in samples with satisfactory results 1
K ey w ords :p 2chlorophenylhydrazine hydrochloride ;reversed phase high performance liquid chromatography ;determination
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