食(饮)具大肠菌群两种检测方法比较

　　[摘要]目的 对食（饮）具消毒卫生标准GB14934-94细菌指标大肠菌群检测方法――纸片法和发酵法的检验方法进行比较。方法 用大肠杆菌标准菌株（ATCC25922）对两种检验方法进行实验。结果 在菌量很小的情况下，大胃肠菌群发酵法阳性率与大肠菌群纸片法阳性率结果相差甚远。结论 两种方法检测大肠菌群，当菌量＜1cfu/mL时结果有明显差异。 　　[关键词] 食（饮）具大肠菌群；发酵法；纸片法 　　[中图分类号] R378.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）22-82-02 　　 　　Comparison of Two Kinds Methods for Detection of Coliform On Tableware 　　GAO Haiying WANG Junhua 　　Disease Control and Prevention Center of Jiangyin City in Jiangsu Province， Jiangyin 214431，China 　　 　　[Abstract] Objective To compare paper disk method and fermentation method for detection of coliform on tableware，on the basis of bacteria coliforms detection methods in tableware health standard GB14934-94 with disinfection. Methods Two kinds of testing method were tested by E.coli strains of the standard （ATCC25922）. Results There was a significant difference in positive rates between two methods in the situation of the content of bacteria is small. Conclusion There is significant difference between the test paper disk method and the fermentation method when the content of bacteria ＜1cfu/mL. 　　 [Key words] Coliform on tableware；Fermentation method； Paper disk method 　　 　　中华人民共和国国家标准食（饮）具消毒卫生标准GB 14934-94中细菌指标大肠菌群的检测方法有两种：发酵法和纸片法。发酵法的检验方法按GB/T 4789.3-2008执行，纸片法采用专用的大肠菌群快速检验纸片进行检验。国标注明：发酵法与纸片法任一方法的检验结果均可作为判定依据。然而检验工作者在检验过程中发现，纸片法的大肠菌群检出阳性率大于发酵法。因此，本实验室应用大肠杆菌标准菌株（ATCC25922）对两种方法进行比较，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 标准菌种及培养基 　　大肠杆菌ATCC25922由江苏省疾病预防控制中心提供；营养琼脂（批号20110309）、乳糖胆盐发酵培养基（批号20101204）均由北京陆桥技术有限责任公司提供；大肠菌群食（饮）具快速检测纸片（批号20101019）由南京三爱实业有限公司提供。 　　1.2 实验方法 　　标准菌株大肠杆菌经营养肉汤活化采用第3～5代的菌株，菌株用生理盐水稀释至0.5麦氏单位（菌量约108/mL）。本次实验共做20个批次，每批实验需3个不同稀释度（菌量约10/mL、1/mL、10-1/mL）的实验菌液，每个稀释度2mL实验菌液分别加入2块培养皿做菌落计数；1mL实验菌液加入50mL生理盐水制成样液，按GB/T 4789.3-2008进行大肠杆菌发酵法测定；1mL实验菌液加入大肠菌群食（饮）具快速检测纸片中经37℃18h后观察结果。 　　2 结果 　　2.1 实验观察 　　发酵法根据乳糖胆盐发酵阳性管查MPN表。纸片法观察纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性；纸片上偶见红色斑点的把纸片放入10mL乳糖胆盐单料培养液中，经培养后产酸产气为阳性。 　　2.2 大肠菌群不同检测方法结果比较 　　结果记录根据以上实验观察结果，每批实验记录两个检测限稀释度的实验数据。见表1。 　　2.3 结果比较 　　实验结果表明，菌量相同菌落总数＞1cfu/mL，大肠菌群发酵法阳性率为100%，大肠菌群纸片法阳性率为100%，结果相同。菌量相同菌落总数＜1cfu/mL，大肠菌群发酵法阳性率为15%（3/20），大肠菌群纸片法阳性率为75%（17/20），结果相差甚远。 　　3 讨论 　　通过本次实验发现，两种检验方法对于大肠菌群菌量＞１cfu/mL时阳性检出率相同。而在菌量很小的情况下，大肠菌群菌量＜1cfu/mL时阳性检出率存在明显差异。证实了在食（饮）具大肠菌群的两种检测方法上，大肠菌群纸片法阳性率高于大肠菌群发酵法阳性率。根据GB14934-94采样方法，纸片法是用无菌生理盐水湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面30s后取下，置于无菌塑料袋内；发酵法是将10张5cm2（2.5cm2×2.0）的灭菌滤纸片紧贴食具内面1min后置入50mL灭菌生理盐水中充分振荡后制成原液。这两种方法最大的区别就是纸片法为采样后直接培养观察结果，发酵法是采样后充分振荡把细菌洗脱在生理盐水中制成原液再进行检测；那么在菌量很小的情况下纸片法的直接观察阳性率就会高，而发酵法检验过程中涉及细菌的洗脱及取检验样液的不确定会影响结果的阳性率。也就是在日常工作中，餐具大肠菌群菌量小的情况下用不同的检测方法所得出的结果是不同的。 　　在GB 14934-94标准中，纸片法的结果判断是：“若纸片保持紫色不变为大肠菌群阴性，纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性”。在实际工作中经常会有的一种现象是纸片未变黄，在紫蓝色背景呈现几个红斑或片状红晕，在这种情况下就不能根据标准简单地判为阴性，而应该无菌操作把纸片投入10mL乳糖胆盐单料培养液中按发酵法检验判定是阴性还是阳性。这点非常重要，因为我们在日常工作中经常碰到这种情况，经发酵法检验后阳性率很高。遇婷[1]的大肠菌群纸片法与发酵法检测食具消毒效果比较中，11份结果判为阴性的可疑纸片，再按大肠菌群发酵法检验后有6份为阳性，阳性率为54.5%。 　　建议在现有标准未改版的情况下，检验工作者对于无法判定结果的纸片要用发酵法进行确认。同时建议在将来的新标准改版时对于基层实验室出现的问题多加考虑和改进[2]。 　　[参考文献] 　　[1] 遇婷.大肠菌群纸片法与发酵法检测食具消毒效果比较[J]. 预防医学情报杂志，2008，24（12）：1016-1017. 　　[2] 高晓霞，邢宝芝.大肠菌群快速检测纸片法与培养发酵法对餐饮具消毒效果检测结果的比较[J]. 中国民族民间医药杂志，2008，17（6）：62-63. 　　（收稿日期：2011-06-09）