3女贞子水提物中有效成分及多糖含量分析

安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＡｎｈｕｉ

Ａ画．Ｓｃｉ．２０１２，４０（３３）：１６１２０—１６１２２责任编辑石金友责任校对卢瑶

女贞子水提物中有效成分及多糖含量分析

陶阿丽，戴一，张国升

（安徽新华学院药学院，安徽合肥２３００８８）

摘要［目的］分析女贞子水提物中成分并测定多糖含量。［方法］利用煎煮法提取女贞子中的水提物成分，然后通过化学方法对成分进行分析鉴别，并采用苯酚一硫酸测定其水提物中多糖含量。［结果］女贞子水提物中含有水溶性蛋白质、三萜皂苷类、黄酮或其苷类、二氢蒽醌类、挥发油、多元酚类和多糖类等；女贞子多糖含量为１０．３ｍｇ／ｇ。［结论］女贞子水提物成分种类较多，且多糖含量较高。

关键词女贞子（ＦＲＵＣＴＵＳＬＩＧＵＳＴＲＩ

ＬＵＣＩＤＩ）；成分类别；多糖

中图分类号￥５６７．２３＋９

文献标识码Ａ文章编号０５１７—６６１１（２０１２）３３—１６１２０—０３

ＣｏｍｐｏｎｅｎｔＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｑｕｅｏｕｓＥｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＦＲＵＣＴＵＳＬＩＧＵＳＴＲＩＬＵＣＩＤＩａｎｄｔｈｅＣｏｎｔｅｎｔＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＩｔｓＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ

ＴＡＯＡ・Ｕｅｔａｌ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ．ＡｎｈｕｉＸｉｎｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｈｅｆｅｉ，Ａｎｈｕｉ２３００８８）

Ａｂｓｔｒａｃｔ

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ｄｉｈｙｄｒｏ—ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ。ｖｏｌａｔｉｌｅｏｉｌｓ．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．ａｎｄｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ．Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｃｏｎｔｅｎｔｉｎ

ＦＲＵＣＴＵＳＵＧＵＳ７ＩＲＩＬＵＣＩＤＩｒｅａｃｈｅｄ１０．３ｍｇ／ｇ．１ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｒｅｗｅｒｅｖａｒｉｏｕｓｔｙｐｅｓｏｆｔｌｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＦＲＵＣＴＵＳＬＩＧＵＳＴＲＩＬＵＣＩＤＩ：ａｎｄｔｈｅｙｈａｄｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｃｏｎｔｅｎｔ

ｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ＦＲＵＣＴＵＳ

ＵＧＵＳⅡＵＬＵＣＩＤＩ：Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｔｙｐｅｓ：Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ

中药女贞子（ＦＲＵＣＴＵＳＬＩＧＵＳＴＲＩ

ＬＵＣＩＤＩ）为木犀科比ｌ：１０（Ｗ／Ｖ，ｇ／ｍｌ，下同）加入蒸馏水，回流提取，每次１．５

（Ｏｌｅａｃｅａｅ）女贞（Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ

ｌｕｃｉｄｕｍ

Ａｉｔ．）的干燥成熟果实…，

ｈ，提取３次，合并提取液，抽滤，滤液放置水浴锅中加热浓缩在我国资源丰富，华东、华南、西南及华中各地均产，主要含至浓度为１．２ｇ／ｍｌ，再转移到锥形瓶中，保存待用。每次取有齐墩果酸、熊果酸、乙酰齐墩果酸、女贞子苷和红景天苷等时用水稀释至适宜浓度，尽可能使结果现象明显。多种活性成分旧－。女贞子主要用于肝肾阴虚、头晕目眩、耳１．２．２样品溶液的成分分析。

鸣、头发早白和腰膝酸软等症的治疗。３１。女贞子属于中药补１．２．２．１蛋白质、多肽与氨基酸。（１）蛋白质。加热或加盐益类药物中的上乘之品，已有２０００多年的应用历史，且多为酸试验。取１ｍｌ供试品溶液，置试管中，加热至沸或加浓度

汤剂，可见水提成分是其药理作用的物质基础。

＿

５％盐酸，观察现象。（２）多肽。缩二脲试验。取ｌＩＩｌｌ供试

女贞子多糖具有抗肿瘤、免疫、降血脂和通便等活性‘４。，品溶液，加２滴浓度１０％氢氧化钠溶液，充分摇匀，逐滴加入因此可以注重对女贞子中糖的开发。目前，关于女贞子水提硫酸铜试液，随加随摇匀，观察现象。（３）氨基酸。茚三酮

物成分的研究鲜有报道。因此，笔者以水为溶剂对女贞子进

试验。

行提取，采用物理化学方法对其水提物成分进行初步地鉴１．２．２．２皂苷。（１）泡沫试验。取２ＩＩｌｌ供试品溶液，置带塞

定，并测定水提物中的多糖含量，以期为女贞子的进一步开试管中，用力振摇３ｍｉｎ，观察现象，若有泡沫出现，观察泡沫发利用提供依据。量。另取供试品溶液２份，１份加盐酸，１份加０．１ｍｏｌ／Ｌ氢１材料与方法氧化钠，振摇，观察２试管中所产生的泡沫量。（２）醋酐一浓１．１材料

硫酸反应。取２份供试品溶液于２只试管中，分别加入适量

１．１．１研究对象。女贞子，于２０１１年１２月７日采自安徽新

醋酐一浓硫酸溶液，观察现象。（３）三氯醋酸反应。取２份

华学院校园，由庆兆老师鉴定为木犀科女贞（Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ

ｌｕｃｉｄ－

供试品溶液于２只试管中，１份加三氯乙酸并加热至１００℃，

ｌｚｒＲ

Ａｉｔ．）的成熟果实。

另ｌ份加入三氯乙酸并加热至６０℃，观察现象。

１．１．２主要仪器。ｕＶ－４８０２Ｓ型紫外一可见分光光度仪，购１．２．２．３黄酮或其苷类。（１）盐酸一镁粉试验。取１ＩＩｌｌ供

自尤尼柯（上海）仪器有限公司；ＦＡ２００４型电子天平，购自上

试品乙醇溶液，加入少许镁粉，然后加浓盐酸４～５滴，置沸海民桥精密科学仪器有限公司；ＬＤＺ４—１．２型台式低速自动

水浴中加热２—３ｍｉｎ，观察现象。（２）碱液试验。取供试品

平衡离心机，购自北京京立离心机有限公司。乙醇溶液点于滤纸上（晾干后，再点１次），晾干后，喷雾浓度１．１．３主要试剂。所用试剂均为分析纯，市售。１％碳酸钠溶液，观察现象。（３）荧光试验。取１ｌｌｌｌ供试品

１．２方法

乙醇溶液，在沸水浴上蒸干，加入饱和硼酸丙酮溶液及浓度１．２．１样品溶液的制备。取１００．００ｇ女贞子，研碎，按料液

１０％枸橼酸丙酮溶液各０．５ｌＩｌｌ，蒸去丙酮后，在紫外光灯下

观察。（４）与铝盐的络合反应。常用试剂为浓度１％三氯化

基金项目安徽省教育厅自然研究项目（ＫＪ２０１１２１５９）。

铝或亚硝酸铝溶液。

作者简介陶阿丽（１９８３一），女，安徽合肥人，讲师，硕士，从事基础化学及天然产品开发研究，Ｅ－ｍａｉｌ：１９８２３４３７８５＠ｑｑ．ｃｏｍ。

１．２．２．４蒽醌或其苷类。取１０ＩＩｌｌ供试品乙醇溶液，蒸去乙

收稿日期

２０１２－０７－２０

醇，残渣加２～３ｒＩｌｌ浓度５％氢氧化钠溶液，在沸水浴中加热

４０卷３３期陶阿丽等女贞子水提物中有效成分及多糖含量分析

１６１２１

１５

ｍｉｎ，放冷后过滤，滤液加稀盐酸酸化，加乙醚提取。取乙１．５、２．０、２．５、３．０和３．５

ＩＩｌｌ标准贮备液，分别置２５Ｉｌｌｌ量瓶

醚提取液照下列试验：（１）碱性试验。取上述乙醚提取液，加等量浓度１％氢氧化钠溶液，摇匀，观察现象，加入少许浓度３％过氧化氢溶液，在沸水浴中加热４ｍｉｎ，观察现象，再加酸酸化，观察现象，最后加碱碱化并观察现象。（２）醋酸镁试验。取１ｍｌ上述乙醚提取液，蒸去乙醚，残渣加入１ｍｌ无水

中，用双蒸水定容，精密量取对照品稀释液２ｍｌ于１０ＩＩｌｌ具

塞试管中，加入１ｍｌ新鲜配制浓度５％苯酚溶液，迅速加入７

“浓硫酸，放置５ｍｉｍ，摇匀，置沸水浴中加热１５ｍｉｎ，于冰水中１０ｍｉｎ，再放置２０ｍｉｎ，取出，于４９０ｎｍ波长处测定吸光

度。以吸收度Ａ为横坐标，葡萄糖浓度ｃ浓度为纵坐标，进行回归处理，计算回归方程。（２）精密度试验。精密吸取标

准液，按照“（１）”项下方法显色，于４９０ｎｍ波长处连续测定吸光度５次，计算吸光度的ＲＳＤ。（３）稳定性试验。精密吸

乙醇溶解，再加入３滴浓度１０％醋酸镁甲醇溶液，观察现象。１．２．２．５强心苷。取供试品乙醇溶液分别作碱性苦味酸试

验和三氯化铁冰醋酸试验（ｋｅｌｌｅｒ反应）。

１．２．２．６生物碱。取２０ＩＩｌｌ供试品酸性乙醇溶液，调节ｐＨ值至６～７，蒸去乙醇，残渣加４～５ＩＩｌｌ浓度５％盐酸溶液溶

取标准液，按照“（１）”项下方法显色，分别于ｏ、１０、２０．３０、４０、

５０和６０ｍｉｎ在４９０ｎｍ波长处测定吸光度，计算１ｈ内吸光

解，滤过，滤液进行碘化铋钾试验、碘化汞钾试验、碘一碘化钾试验和硅钨酸试验，观察现象。

１．２．２．７挥发油。（１）取供试品乙醚溶液，点在滤纸片上，

待溶剂挥发后，喷雾浓度０．０５％荧光素钠溶液，再将滤纸片

度的ＲＳＤ。（４）重复性试验。精密称取２０ｍｇ粗多糖浸膏置

于１００ｍｌ容量瓶，共５份，定容，摇匀后备用，分别按照

“（１）”项下方法显色测定，计算多糖含量的ＲＳＤ。

１．２．８样品的含量测定。取女贞子３份，按照‘１．２．５”项下

置碘蒸气上熏几分钟，观察现象。（２）取供试品乙醚溶液，置

白瓷皿中，待溶剂挥发后，残渣中加浓度１％香草醛盐酸液，

的方法制备供试品溶液，精密吸取１．０ｍｌ供试品溶液，按“１．２．６”项下方法显色，测定吸光度，并计算总多糖含量。

２结果与分析

２．１样品溶液的成分分析

观察现象。

１．２．２．８酚类。香草醛一盐酸试验：取检品的水溶液点于

滤纸片上，干后，喷雾或滴加香草醛一盐酸试液，观察现象。１．２．２．９糖、多糖或苷类。（１）碱性酒石酸铜试液。取检品的水溶液１～２ＩＩｌｌ（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入１

ＩＩｌｌ

２．１．１蛋白质、多肽与氨基酸。（１）蛋白质。试验组试管中

溶液浑浊并有沉淀，表明有水溶性蛋白质存在（图１）。（２）

多肽。逐滴加入硫酸铜试液过程中溶液变紫色，表明有蛋白质或氨基酸存在（图１）。＜３）氨基酸。现象不明显，可能是

提取液颜色干扰了试验现象。

置、

碱性酒石酸铜试液，于沸水浴上加热５ｍｉｎ，观察现象。（２）仪

萘酚试验（Ｍｏｌｉｓｃｈ紫环反应）。取１ｒｎｌ检品的水溶液，加浓

度５％萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴人５—６滴浓硫酸，使成２液层，待２～３ｍｉｎ后，观察２层液面颜色。（３）多糖水解

２．１．２皂苷。（１）泡沫试验。观察发现脊持久性蜂窝状泡

沫（维持１０ｍｉｎ以上）产生，泡沫量不少于液体体积的１／３，

的验证试验。取１ｍｌ检品的水溶液，加入稀盐酸５滴，置沸

水浴中加热１０～１５ｍｉｎ，然后用浓度１０％氢氧化钠液中和至

且２试管所产生的泡沫量几乎等量，表明女贞子中皂苷成分主要为三萜皂苷（图１）。（２）醋酐一浓硫酸反应。试验组呈

现红色，表明有三萜皂苷存在（图１）。（３）三氯醋酸反应。

中性，再加新配制的碱性酒石酸铜试淮４滴，另取检液１

～６

ｒｎｌ，

不加酸水解直接加入上述试液４滴，２管同置水浴上煮沸５

ｍｉｎ，将水解后生成棕红色沉淀的量与未经水解的进行比较。

１．２．３浓度５％苯酚液的制备。称取１００．００ｇ苯酚，加０．１ｇ铝条和０．２ｇ碳酸氢钠，用套式电热器加热蒸馏，收集１８２℃馏份，称定５．００ｇ，置于棕色量瓶中，加少量水溶解后，加水定容至１００ｍｌ，充分混匀，冷藏，备用。

１．２．４对照品溶液的制备。精密称取在１０５℃干燥至恒重

观察２试管均显红色，说明皂苷中既含三萜皂苷又含甾体皂

苷（图１）。

２．１．３黄酮或其苷类。（１）盐酸一镁粉试验。试验组有红

色或紫红色出现，表明有游离黄酮类或黄酮苷（图１）。（２）

碱液试验。试验组出现亮黄、绿或橙黄色，表明有黄酮或其苷类（图１）。（３）荧光试验。试验组管内呈现强烈的绿色荧

光，表明有黄酮或其苷类。（４）与铝盐的络合反应。生成的络合物为黄色（Ａ一＝４１５ｎｌｎ），并有荧光，表明女贞子水提物

的葡萄糖对照品３０．０ｍｇ，加蒸馏水溶解并定容至１００ｍｌ容

量瓶中，摇匀后备用。

成分含有黄酮类或其苷类。

２．１．４蒽醌或其苷类。（１）碱性试验。试验组的水层呈现红色，在加入少许浓度３％过氧化氢溶液后，在沸水浴中加热

４

１．２．５供试品溶液的制备。取女贞子１００ｇ，研碎，按料液比

１：１０（ｇ／ｍ１）加入蒸馏水，回流提取，每次１．５ｈ，提取３次，合

ｍｉｎ，红色不褪，当加酸酸化后，红色消失，加碱碱化后红色

并提取液，抽滤，滤液浓缩后干燥，得粗多糖浸膏，精密称取

２０

又出现，表明有蒽醌类或其苷类化合物（图１）。（２）醋酸镁试验。试验组显红色（如显橙黄色，可能为二氢蒽醌）（图１）。２．１．５强心苷。试验结果均为阴性，所以女贞子水提物成分中不含有强心苷。

２．１．ａ生物碱。试验结果表明，４个试验均未有明显现象，

１１１９粗多糖浸膏置于１００ｍｌ容量瓶，定容，摇匀后备用。

１．２．６最大吸收波长的测定。精密吸取对照品和供试品溶

液各１ｍｌ于１０ＩＩｌｌ的具塞试管中，分别精密加入２．０ｍｌ浓度５％苯酚溶液，７．０ｍｌ浓硫酸，混匀，于１００℃水浴加热２０ｍｉｎ，于４００—８００ｎｌｎ范围内扫描，选择最大吸收波长。

可推测其不含有生物碱类。

２．１．７挥发油。（１）试验组产生黄或黄绿色斑点，背景为粉

１．２．７方法学考察。（１）线性关系的考察。精密量取１．０、

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安徽农业科学

２０１２年

红色，表明含有挥发油（图１）。（２）试验组显红棕色，可进一生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀，表明有还原糖（图１）。

（２）ｑ萘酚试验（Ｍｏｌｉｓｃｈ紫环反应）。２层液面出现紫红色环

步推知其中含有挥发油（图１）。

２．１．８酚类。试验组呈现红色斑点，表明有多元酚类物质（图１）。

（糖、多糖或苷类），进一步探知其中可能含有多糖（图１）。

（３）多糖水解的验证试验。水解后生成棕红色沉淀的量比未经水解的多，表明有多糖。

２．１．９糖、多糖或苷类。（１）碱性酒石酸铜试液。试验组产

注：ａ为蛋白质的盐酸试验（左管为对照组，右管为试验组）．ｂ为蛋白质、多肽与氨基酸的缩二脲试验（左管为试验组，右管为对照组）；ｃ为皂苷

泡沫试验（不加酸碱）；ｄ为皂苷泡沫试验（左管为加氢氧化钠，右管为加盐酸）；ｅ为皂苷三氯醋酸反应（左皿为试验组，右皿为对照组）；ｆ为皂苷三氯醋酸反应（加热１００℃时现象）；ｇ为皂苷三氯醋酸反应（加热６０℃时现象）；ｈ为黄酮盐酸一镁粉试验（左皿为试验组，右皿为对照组）；ｉ为黄酮碱液试验（左图为对照组，右图为试验组）“为葸醌碱性试验（加浓度１％氢氧化钠摇匀后）；ｋ为蒽醌碱性试验（加酸酸化后）；ｌ为蒽醌碱性试验（再加碱碱化后）；ｍ为蒽醌醋酸镁试验（左皿为对照组，右皿为试验组）；ｎ为挥发油试验（喷雾浓度０．０５％荧光素钠溶液，碘熏）；ｏ为挥发油试验（残渣加浓度１％香草醛盐酸液）；ｐ为酚类定性试验（左图为对照组，右图为试验组）；ｑ多糖碱性酒石酸铜试液（左管为对照组，右管为试验组）；ｒ为多糖ｃｔ萘酚试验；ｓ为多糖水解的确证试验（左管为对照组，右管为试验组）。

圈１女贞子水提物成分类试验

２．２最大吸收波长的测定测得显色后的对照品和供试品溶液最大吸收波长均为４９０ｎｍ，故选择４９０ｎｍ作为最佳测定波长。

２．３方法学考察（１）线性关系考察。计算得回归方程为：

ｌ，＝１１．５３６Ｘ一０．０８４５，Ｒ＝０．９９０

３结论与讨论

试验结果表明，女贞子中水提物成分含有水溶性蛋白质、三ｉ晦．皂苷类、黄酮或其苷类、二氢蒽醌类、挥发油、多元酚类和多糖类等，表明女贞子水提物的成分类型丰富。试验采用紫外分光光度计对女贞子多糖含量进行测定，测得的女贞

子中多糖含量为１０．３ｎｌｇ／ｇ。参考文献

９。试验结果表明，在０．０１２～

０．０４８－ｎ∥ＩＩｌｌ范围内，葡萄糖浓度与吸光度具有良好的线性

关系。（２）精密度试验。计算得吸光度的ＲＳＤ为Ｏ．６７％，表明方法的精密度良好。（３）稳定性试验。计算得ｌｈ内吸光

［１】国豸鳓典委员会中华人民共和国药典（２０ｌｏ版一部）［ｓ］．北京：中国

度的冗：如为１．５０％，表明供试品溶液在１ｈ内稳定。（４）重复性试验。计算得多糖含量的ＲＳＤ为１．３４％，表明方法重

管肿白ｂｙ及ｌ土Ｒ’３．。

［２］瑟瑟攀薏譬整耧ｊ篓：女贞子研究进展［Ｊ］．中华医学写作杂志，

２００４，１１（８）：１５９９—１６０１．

［３］＜全国中草药汇编＞编写组全国中草药汇编［Ｇ］．北京：人民卫生出版

社，１９９６：１３８．

２．４样品的含量测定计算得３批女贞子的多糖平均含量

为１０．３

［４］张欣，｛毛钦鹃女贞子和水蜡树果实中多糖与总黄酮含量比较［Ｊ］．安

ｍ∥ｇ。粼幽榉－∞ｌｏ，３８（３３）：１８９９０—１８９９１，１９０１５・

女贞子水提物中有效成分及多糖含量分析

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

陶阿丽， 戴一， 张国升

安徽新华学院药学院,安徽合肥,230088安徽农业科学

Journal of Anhui Agricultural Sciences2012,40(33)

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