脯氨酸检测试剂盒(茚三酮微板法)
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)
简介：
脯氨酸(Proline，Pro) 是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，水中可溶162g 左右，易潮解不易得结晶，有甜味。与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等) ，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法) 检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以酶标仪测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度) 与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水 2、 研钵或匀浆器 3、 离心管或试管 4、 滤纸或纱布 5、 水浴锅 6、 96孔板 7、 酶标仪
操作步骤(仅供参考) ：
1、 准备样品：
①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入lPRO Lysis buffer后匀浆或研磨，沸水浴期间经常摇动) ，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于脯氨酸的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，4℃保存备用，用于脯氨酸的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的脯氨酸，可以使用PRO Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、 配制茚三酮显色液: 取出1支茚三酮，准确溶解于茚三酮稀释液，加热搅拌至完全溶解，
混匀，即为茚三酮显色液。4℃避光备用，48h 有效。注意：茚三酮稀释液具有一定腐蚀性，请小心操作。
3、 配制系列脯氨酸标准溶液：取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后，以脯氨酸标准
4、 PRO 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注
意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
5、PRO 测定：迅速冷却加入PRO 萃取液，振摇30s ，静置片刻，取上清液转移至新的离心管或试管，离心，取上清液备用。以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯) 检测标准管520nm 处吸光度；以PRO 萃取液调零，分光光度计(1cm光径比色杯)
检测测定管520nm 处吸光度。
计算：
以系列脯氨酸标准(1-6号管) 含量(μg) 为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算脯氨酸含量。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量：
植物组织样品PRO(μg /g)=C×V T /(W×V S ) 式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) V T =脯氨酸提取液总体积(ml) W=样品鲜重(g)
V S =测定时加入提取液体积(ml)
血清、尿液等样品AA(μg /ml)=C×N /VS 式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) N=稀释倍数
V S =测定时加入提取液体积(ml)
注意事项：
1、 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。 2、 PRO Assay buffer应密闭保存，防止挥发。
3、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体
积。
4、 所测样本的浓度过高，应用PRO Lysis buffer稀释样品后重新测定。
有效期：6个月有效。 相关：