酒曲糖化酶活力的测定
酒曲糖化酶活力测定的实验方案
一、实验原理
固体曲中糖化酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）能将淀粉水解为葡萄糖，进而被微生物发酵，生产酒精。糖化酶活力高，淀粉利用率就高。可溶性淀粉经糖化酶催化水解产生葡萄糖，用斐林试剂法测定。
二、仪器试剂
⒈仪器:烧杯，量筒，容量瓶，250ml锥形瓶，碱式滴定管，试剂瓶， 移液管
⒉试剂：（1）20g/L 可溶性淀粉溶液：准确称取绝干计的 可溶性淀粉2g（准确至0.001g），于50mL烧杯中，用少量水调匀后，倒入盛有70mL沸水的烧杯中，并用20mL水分次洗涤小烧杯，洗液合并其中，用微火煮沸到透明，冷却后用水定容至100mL，当天配置使用。
（2）1g/L葡萄糖标准溶液：准确称取预先在100~105℃烘干的无水葡萄糖1g(准确至0.0001g)溶解于水，加5mL浓盐酸，用水定容至1L。
（3）斐林试剂
A.甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4 5H2O）0.05g亚甲基蓝，溶于水并稀释 至 1L。
B.乙液：称取酒石酸钾钠，54gNaOH，4g亚铁氯化钾溶于水并稀释至1L。
（4）乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH4.6）
a.2mol/L 乙酸溶液：取118mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。
B.2mol/L 乙酸钠溶液：称取272g乙酸钠（CH3COOH·3H2O），溶于水并稀释至1000mL。
将a，b等体积混合，即为pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
（5）0.5mol/L H2SO3 溶液：量取28.3mL 浓硫酸，缓慢倒入水中并稀释至1L。
（6）1 mol/L NaOH 溶液。
三.测定步骤
（1）5%干曲浸出液制备
称取相当于5g的干曲的曲粉（准确至0.01g）［曲粉量（g）=5×1/（1－水分含量）］，置于250mL烧杯中，加水（90－5×水分%）mL，缓冲液10mL，
在30℃水浴中浸出1h，每隔15min 搅拌1次。然后用干滤纸过滤，弃去最初5mL，接收50mL澄清滤液备用。
（2）糖化液制备
吸取20g/L 可溶性淀粉溶液50mL于100mL容量瓶中，在35℃水浴保温20min后，准确加入酶浸出液10mL，摇匀并立即计时，在35℃水浴中准确保温1h。立即加入3mL 1mol/L NaOH 溶液，以停止反应。再冷却到室温，用水定容至刻度线。此时溶液应呈碱性。
空白液制备：吸取20g/L 可溶性淀粉溶液50mL于100mL容量瓶中，在35℃水浴保温20min后，先加入3mL 1mol/L NaOH 溶液，再准确加入酶浸出液10mL，摇匀并立即计时，在35℃水浴中准确保温1h。冷却到室温，定容。此时溶液应呈碱性。
（3）糖分测定
斐林试剂法，先取适量糖化液于斐林试剂中，用标准葡萄糖溶液滴定。
四 数据记录与结果计算
糖化酶活力定义：1g 干曲在35℃、pH4.6条件下，反应1h，将可溶性淀粉分解为葡萄糖1mg 所需的酶量称为1个酶活单位（U/g）。
(V0-V)⨯C⨯100⨯100⨯1000糖化酶活力（U/g）= 5⨯5⨯10
1.斐林试剂的标定
2.糖化酶活力测定
1、实验结论：本次试验失败，通过计算得到，菲林试剂的浓度值是一样的，查 国标得到计算的糖化酶活力偏低，所以实验失败。
2、实验总结：1.称量药品时操作不规范，误差较大。
2.移取药品时取用不同的移液管导致缓冲溶液瘦污染，浓度降 低。
3.在滴定时候忘记加入指示剂。
4.在水浴中保温时间没到到。